เพื่อตรวจสอบความไวของจุลินทรีย์ต่อยาปฏิชีวนะ มีหลายวิธี โดยวิธีที่พบมากที่สุดคือ: วิธีการเจือจางแบบอนุกรมในอาหารที่เป็นของเหลวหรือวุ้นสารอาหาร วิธีการแพร่กระจายของวุ้น (วิธีการของดิสก์ที่อิ่มตัวด้วยยาปฏิชีวนะ) และ หลายวิธีเร่ง
การกำหนดความไวของจุลินทรีย์ต่อยาปฏิชีวนะ ในหลอดทดลอง ดำเนินการภายใต้สภาวะที่แตกต่างจากที่ยาทำหน้าที่ในร่างกายอย่างมีนัยสำคัญ ผลลัพธ์ของมันได้รับอิทธิพลอย่างมากจากปัจจัยต่างๆ เช่น องค์ประกอบและ pH ของสารอาหาร ขนาดของปริมาณการให้วัคซีน อายุของวัฒนธรรม สภาวะการเพาะปลูก ฯลฯ เมื่อใช้วิธีการแพร่กระจายของวุ้น ผลการวิจัยคือ โดยได้รับอิทธิพลจากความหนาของชั้นของสารอาหาร ความชื้น อัตราการแพร่กระจายของยาปฏิชีวนะ อัตราการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์ที่ศึกษา ฯลฯ วิธีการแพร่กระจายของวุ้น (วิธีดิสก์กระดาษ) เป็นวิธีที่ง่ายและใช้กันอย่างแพร่หลายที่สุด แต่ เป็นเชิงคุณภาพเท่านั้น วิธีการเจือจางยาปฏิชีวนะแบบต่อเนื่องในอาหารเลี้ยงเชื้อภายใต้สภาวะการทดลองมาตรฐานเป็นวิธีการเชิงปริมาณที่เชื่อถือได้และแม่นยำยิ่งขึ้น
วิธีการเจือจางแบบอนุกรม
ข้อบ่งชี้สำหรับการกำหนดความไวโดยวิธีการเจือจางแบบอนุกรมคือความจำเป็นในการได้รับข้อมูลเชิงปริมาณ (ส่วนใหญ่อยู่ในกระบวนการที่รุนแรง) สำหรับการรักษาด้วยยาปฏิชีวนะแบบควบคุม (การพัฒนาสูตรการบริหาร)
การกำหนดระดับของความไวต่อยาต้านแบคทีเรียจำนวนหนึ่งของจุลินทรีย์ที่ทำให้เกิดกระบวนการติดเชื้อส่งผลต่อการเลือกใช้ยาปฏิชีวนะ (การปฏิเสธยาที่มีลักษณะเป็นพิษค่อนข้างสูงและมีความไวปานกลางของเชื้อโรคต่อพวกเขา) ปริมาณของยา (ความเข้มข้นของ ยาปฏิชีวนะในเลือดควรสูงกว่า MIC 2-3 เท่าเมื่อเทียบกับเชื้อโรค) และรูปแบบการบริหาร การกำหนดความไวเชิงปริมาณยังจำเป็นเพื่อกำหนดกิจกรรมการฆ่าเชื้อแบคทีเรียของยาที่เลือก (เพื่อรับประกันผลการรักษาอย่างรวดเร็วและไม่เกิดขึ้นอีก) ที่เกี่ยวข้องกับเชื้อโรคนี้
มีการปรับเปลี่ยนวิธีการสองแบบ - การกำหนดจุลินทรีย์ที่ไวต่อยาปฏิชีวนะในอาหารที่เป็นของเหลวและของแข็ง
วิธีนี้ทำให้สามารถระบุความเข้มข้นของยาปฏิชีวนะที่ยับยั้งการเจริญเติบโตขั้นต่ำ (MIC) สำหรับสายพันธุ์ที่แยกได้ของเชื้อโรค ประกอบด้วยการเตรียมชุดของยาปฏิชีวนะเจือจางต่อเนื่องในอาหารที่มีการแนะนำการเจือจางทั้งหมดของวัฒนธรรมภายใต้การศึกษาเพื่อยับยั้งการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์ที่มีความเข้มข้นของยาปฏิชีวนะในอาหารเลี้ยงเชื้อระดับความไวของ จุลินทรีย์จะถูกตัดสิน
"การรักษาด้วยยาปฏิชีวนะอย่างมีเหตุผล"
S.M. นวชิน, I.P. Fomina
ความล้มเหลวของการรักษาด้วยยาปฏิชีวนะอาจเนื่องมาจากการเลือกขนาดยาและวิธีการให้ยาไม่ถูกต้อง การเริ่มการรักษาล่าช้า การใช้ยาปฏิชีวนะในปริมาณต่ำร่วมกับการรักษาร่วมกัน ระยะเวลาในการรักษาไม่เพียงพอ เป็นต้น ระบบเอ็นไซม์ของร่างกาย, การผูกมัดของโปรตีนก็ไม่ได้ถูกนำมาพิจารณาด้วยเสมอไป, เลือดและเนื้อเยื่อ, มวลเนื้อตาย, ฯลฯ ผลลัพธ์ที่ไม่น่าพอใจของการรักษาด้วย ...
วิธีการเร่งในการกำหนดความไวรวมถึงวิธีการที่ตรวจพบการก่อตัวของแบคทีเรียในรูปแบบที่เปลี่ยนแปลงได้ภายใต้การกระทำของยาปฏิชีวนะระหว่างกล้องจุลทรรศน์แบบแบ่งเฟส จุลินทรีย์ในรูปแบบที่ไม่เปลี่ยนแปลงจะเกิดขึ้นเมื่อมีความเข้มข้นของแบคทีเรียในแบคทีเรีย ในกรณีที่ไม่มีมันภายใต้การกระทำของความเข้มข้นของ subbacteriostatic เช่นเดียวกับความต้านทานของสายพันธุ์ที่ศึกษาต่อยา microcolonies ปกติจะเติบโต การเปลี่ยนแปลงทางสัณฐานวิทยาในวัฒนธรรมที่ศึกษาภายใต้การกระทำของยาปฏิชีวนะ ...
ในกรณีของความไวต่อยาปฏิชีวนะของสายพันธุ์ก่อโรค การหมักกลูโคสจะไม่เกิดขึ้นเมื่อปลูกในอาหารที่มีกลูโคส ฟีนอลแดง (เป็นตัวบ่งชี้) และความเข้มข้นบางอย่างของยาปฏิชีวนะ ในกรณีนี้ ตัวกลางจะเปลี่ยนเป็นสีม่วงเนื่องจากการทำให้เป็นด่าง การเปลี่ยนแปลงของสีแดงของตัวกลางเป็นสีเหลืองบ่งบอกถึงการสลายของกลูโคสด้วยการก่อตัวของกรดอันเป็นผลมาจากการเติบโตของความเครียดที่ทนต่อ ...
ในอังกฤษยังคงใช้วิธีกรูฟที่เฟลมมิงเสนอ เพื่อตรวจสอบความไวของจุลินทรีย์ต่อยาปฏิชีวนะด้วยวิธีนี้ แถบจะถูกตัดในจานวุ้นเพื่อให้ได้ร่อง จากนั้นจึงเพาะเชื้อจุลินทรีย์สายพันธุ์ที่ทดสอบด้วยจังหวะในแนวตั้งฉากกับร่อง ร่องนั้นเต็มไปด้วยวุ้น ละลายและทำให้เย็นลงที่อุณหภูมิ 35–60°C ซึ่งประกอบด้วยยาปฏิชีวนะที่เข้มข้น เนื่องจากการแพร่กระจายของยาปฏิชีวนะเข้าสู่สารอาหาร ...
การไม่มีโซนของการยับยั้งการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์รอบ ๆ ดิสก์บ่งชี้ว่าสายพันธุ์ที่ทดสอบนั้นไม่ไวต่อยาปฏิชีวนะนี้ ด้วยโซนที่มีเส้นผ่านศูนย์กลางไม่เกิน 10 มม. ความเครียดจะถือว่าไม่อ่อนไหว ไม่นับโคโลนีเดี่ยวหรือฟิล์มบางๆ ของการเจริญเติบโตภายในเขตการแคระแกร็น ขนาดของโซนอาจแตกต่างกันไปขึ้นอยู่กับความหนาของชั้นวุ้น ความหนาแน่นของสนามหญ้าจุลินทรีย์ และองค์ประกอบของอาหาร อย่างไรก็ตาม…
เพื่อลดขอบเขตของการทดสอบ ควรใช้ชุดดิสก์ โดยคำนึงถึงชนิดของเชื้อโรคที่แยกได้และตำแหน่งของการติดเชื้อ (ดูตารางด้านล่าง) ชุดแผ่นยาปฏิชีวนะขั้นพื้นฐานที่แนะนำสำหรับการทดสอบความไวขึ้นอยู่กับชนิดของวัฒนธรรมที่แยกได้และวัสดุทางพยาธิวิทยา ยาปฏิชีวนะที่มีอยู่ในแผ่นดิสก์ การทดสอบความไวเบื้องต้นของจุลินทรีย์ของวัสดุทางพยาธิวิทยา การทดสอบความไวของเชื้อบริสุทธิ์ หนอง เสมหะ เสมหะ Staphylococcus...
เพื่อควบคุมความถูกต้องและมาตรฐานของการวิจัยในการทดลองแต่ละครั้ง จำเป็นต้องใช้วัฒนธรรมการทดสอบที่มีความไวต่อยาปฏิชีวนะ WHO แนะนำสามวัฒนธรรมจาก American Type Culture Collection เพื่อจุดประสงค์นี้: Escherichia coli (ATCC 25922), Staphylococcus aureus (ATCC 25923), Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853) เมื่อพิจารณาความไวของเชื้อโรคที่แยกได้จำเป็นต้องทำการวิเคราะห์การควบคุมด้วยการวัดโซนของการยับยั้งการเจริญเติบโต ...
การเตรียมจาน วุ้นละลายปานกลาง (น้ำซุปย่อยของ Hottinger ที่มีเอมีนไนโตรเจน 120-140 มก. - 1,000 มล. วุ้นตาฟูอินสกี้ - 15 กรัมโซเดียมฟอสเฟต dibasic - 3 กรัม pH หลังการฆ่าเชื้อ 7.0-7.2 ) เทลงในปริมาณ 20 มล. ลงในจานเพาะเชื้อที่มีขนาดเส้นผ่านศูนย์กลาง 100 มม. วางบนพื้นผิวแนวนอน ก่อนการติดเชื้อพื้นผิวของอาหารแช่แข็งจะถูกทำให้แห้งสำหรับ ...
จากสองวิธีในการพิจารณาความไวของจุลินทรีย์ต่อยาปฏิชีวนะ (ในตัวกลางที่เป็นของเหลวและของแข็ง) วิธีอนุกรมการเจือจางในตัวกลางที่เป็นของเหลวนั้นแม่นยำกว่า ผลลัพธ์ที่ได้จากการกำหนดความไวในตัวกลางของสารอาหารที่เป็นของแข็งนั้นมีความสอดคล้องกันน้อยกว่า ไม่ควรใช้วิธีการเจือจางของวุ้นในการประเมินความไวของจุลินทรีย์ที่ทำให้เกิดการเจริญเติบโตแบบบางและเบาบาง (สเตรปโทคอกคัส, นิวโมคอคซี) หรือแพร่กระจายไปทั่วพื้นผิว ...
ค่า MIC ของยาปฏิชีวนะอาจผันผวนขึ้นอยู่กับขนาดของปริมาณการหว่าน: เมื่อเพิ่มขนาดยาความไวจะลดลงเนื่องจากการเพิ่มขึ้นของปริมาณของ penicillinase ที่เกิดจาก Staphylococci ในตัวกลาง หลอดจะถูกฟักที่อุณหภูมิ 37°C เป็นเวลา 18-24 ชั่วโมง ผลลัพธ์จะถูกนำมาพิจารณาโดยการพิจารณาว่ามีหรือไม่มีการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์ในอาหารที่มียาปฏิชีวนะเจือจางต่างๆ หลอดสตรองสุดท้าย (น้ำซุปใส)…
เชื้อโรคบางชนิดของโรคติดเชื้อที่มีการค้นพบยาปฏิชีวนะมีการเปลี่ยนแปลงเล็กน้อยโดยธรรมชาติของความไวเริ่มต้นต่อยาเหล่านี้ (กลุ่ม A streptococci, pneumococci, meningococci, brucella, เชื้อ Salmonella บางชนิด)
ในเวลาเดียวกัน จุลินทรีย์ที่ทำให้เกิดโรคส่วนใหญ่ได้รับความต้านทานเมื่อเวลาผ่านไปต่อสารต้านจุลชีพที่ใช้กันอย่างแพร่หลาย บางครั้งไม่สามารถควบคุมได้ และใช้อย่างไม่สมเหตุผล ปัญหาการดื้อต่อจุลินทรีย์มีความสำคัญมากที่สุดเมื่อเทียบกับเชื้อ Staphylococci, shigella, Escherichia, Proteus ซึ่งสายพันธุ์ที่ดื้อยาปฏิชีวนะจะถูกแยกออกด้วยความถี่สูงสุด
ตามระดับความไวต่อยาปฏิชีวนะหลัก จุลินทรีย์แบ่งออกเป็นกลุ่มที่อ่อนไหว อ่อนไหวปานกลาง และดื้อยา กลุ่มที่มีความอ่อนไหวประกอบด้วยจุลินทรีย์หลายสายพันธุ์ ซึ่งการเจริญเติบโตของสารอาหารในอาหารจะหยุดลงเมื่อใช้ความเข้มข้นที่สอดคล้องกับปริมาณยาปฏิชีวนะที่ใช้ในการรักษาโดยเฉลี่ย หากระงับเมื่อใช้ยาในปริมาณสูงสุดเท่านั้น จุลินทรีย์ดังกล่าวจะมีความไวปานกลางต่อยาปฏิชีวนะ หากการยับยั้งการเจริญเติบโตทำได้สำเร็จในการทดลองในห้องปฏิบัติการเฉพาะที่ความเข้มข้นสูงมากของยาซึ่งไม่สามารถสร้างขึ้นในร่างกายได้ สารติดเชื้อดังกล่าวจะถูกจัดประเภทว่าดื้อต่อยาปฏิชีวนะ
เพื่อตรวจสอบความไวของจุลินทรีย์ต่อยาปฏิชีวนะ มีหลายวิธี: วิธีการเจือจางแบบอนุกรมในอาหารที่เป็นของเหลวหรือวุ้นสารอาหาร วิธีการแพร่กระจายของวุ้น (วิธีการของดิสก์ที่อิ่มตัวด้วยยาปฏิชีวนะ) และวิธีการเร่ง วิธีการของดิสก์นั้นง่าย ใช้กันอย่างแพร่หลาย แต่ให้คำตอบเชิงคุณภาพเท่านั้น วิธีการเชิงปริมาณที่เชื่อถือได้และแม่นยำยิ่งขึ้นคือวิธีการเจือจางยาปฏิชีวนะแบบต่อเนื่องในอาหารเลี้ยงเชื้อภายใต้สภาวะการทดลองมาตรฐาน ในกรณีส่วนใหญ่ ความสัมพันธ์ของข้อมูลในห้องปฏิบัติการกับข้อมูลทางคลินิกค่อนข้างสมบูรณ์ และการบำบัดก็มีประสิทธิภาพเมื่อศึกษาพลวัต ไม่เพียงแต่ขั้นตอนทางคลินิกของกระบวนการเท่านั้น แต่ยังอาจมีการเปลี่ยนแปลงของเชื้อโรคหรือความไวต่อยาปฏิชีวนะด้วย
ความเข้มข้นของยาปฏิชีวนะในเนื้อเยื่อและของเหลวในร่างกาย ตลอดจนฤทธิ์ต้านจุลชีพเป็นหนึ่งในตัวแปรหลักที่กำหนดประสิทธิภาพของการรักษาด้วยยาปฏิชีวนะ ในการศึกษานี้ วิธีการวิจัยทางจุลชีววิทยาที่ใช้ความสามารถของยาปฏิชีวนะในการชะลอการเจริญเติบโตของจุลชีพทดสอบนั้นใช้กันอย่างแพร่หลาย
เพื่อตรวจสอบความไวของแบคทีเรียต่อยาปฏิชีวนะ (ยาปฏิชีวนะ) มักใช้สิ่งต่อไปนี้:
วิธีการแพร่กระจายของวุ้น . จุลินทรีย์ที่ศึกษาได้รับการฉีดวัคซีนบนอาหารเลี้ยงเชื้อวุ้น จากนั้นจึงเติมยาปฏิชีวนะ โดยปกติยาจะถูกนำไปใช้กับบ่อน้ำพิเศษในวุ้นหรือวางแผ่นดิสก์ที่มียาปฏิชีวนะไว้บนพื้นผิวของเมล็ด ("วิธีแผ่นดิสก์") ผลลัพธ์จะถูกบันทึกในหนึ่งวันโดยมีหรือไม่มีการเติบโตของจุลินทรีย์รอบหลุม (แผ่น)
วิธีการของแผ่นดิสก์นั้นมีคุณภาพและช่วยให้คุณประเมินได้ว่าจุลินทรีย์มีความอ่อนไหวหรือดื้อต่อยาหรือไม่
วิธีการกำหนดความเข้มข้นขั้นต่ำในการยับยั้งและฆ่าเชื้อแบคทีเรีย เช่น ระดับต่ำสุดของยาปฏิชีวนะที่ช่วยให้ในหลอดทดลองป้องกันการเจริญเติบโตที่มองเห็นได้ของจุลินทรีย์ในอาหารเลี้ยงเชื้อหรือฆ่าเชื้ออย่างสมบูรณ์ นี่เป็นวิธีการเชิงปริมาณที่ช่วยให้คุณสามารถคำนวณขนาดยาได้ เนื่องจากความเข้มข้นของยาปฏิชีวนะในเลือดต้องสูงกว่าความเข้มข้นต่ำสุดในการยับยั้งเชื้อที่ติดเชื้อ จำเป็นต้องให้ยาในปริมาณที่เพียงพอสำหรับ การรักษาที่มีประสิทธิภาพและป้องกันการก่อตัวของจุลินทรีย์ดื้อยา
มีวิธีการเร่งความเร็วโดยใช้เครื่องวิเคราะห์อัตโนมัติ
การกำหนดความไวของแบคทีเรียต่อยาปฏิชีวนะโดยใช้วิธีดิสก์วัฒนธรรมแบคทีเรียที่ศึกษานั้นเพาะด้วยสนามหญ้าบนวุ้นสารอาหารหรืออาหาร AGV ในจานเพาะเชื้อ
AGV ปานกลาง: น้ำซุปปลาที่มีสารอาหารแห้ง, วุ้นวุ้น, โซเดียมฟอสเฟต dibasic สื่อเตรียมจากผงแห้งตามคำแนะนำ
แผ่นกระดาษที่มียาปฏิชีวนะจำนวนหนึ่งวางอยู่บนพื้นผิวเมล็ดโดยใช้แหนบที่ระยะห่างเท่ากัน เพาะเลี้ยงที่อุณหภูมิ 37°C จนถึงวันถัดไป ตามเส้นผ่านศูนย์กลางของเขตยับยั้งการเจริญเติบโตของวัฒนธรรมแบคทีเรียที่ศึกษาจะพิจารณาความไวต่อยาปฏิชีวนะ
เพื่อให้ได้ผลลัพธ์ที่เชื่อถือได้ จำเป็นต้องใช้แผ่นดิสก์มาตรฐานและสื่อสารอาหาร เพื่อควบคุมสายพันธุ์อ้างอิงของจุลินทรีย์ที่เกี่ยวข้อง วิธีการแบบแผ่นดิสก์ไม่ได้ให้ข้อมูลที่เชื่อถือได้ในการพิจารณาความไวของจุลินทรีย์ต่อยาปฏิชีวนะโพลีเปปไทด์ที่แพร่เข้าสู่วุ้นได้ไม่ดี (เช่น polymyxin, ristomycin) หากจะใช้ยาปฏิชีวนะเหล่านี้ในการรักษา ขอแนะนำให้กำหนดความไวของจุลินทรีย์ด้วยวิธีเจือจางแบบอนุกรม
การกำหนดความไวของแบคทีเรียต่อยาปฏิชีวนะโดยวิธีการเจือจางแบบอนุกรมวิธีนี้กำหนดความเข้มข้นขั้นต่ำของยาปฏิชีวนะที่ยับยั้งการเจริญเติบโตของการเพาะเชื้อแบคทีเรียที่ศึกษา ขั้นแรก เตรียมสารละลายสต็อกที่มีความเข้มข้นเฉพาะของยาปฏิชีวนะ (µg/ml หรือ IU/ml) ในตัวทำละลายพิเศษหรือสารละลายบัฟเฟอร์ การเจือจางในน้ำซุปที่ตามมาทั้งหมดจะถูกเตรียมจากมัน (ในปริมาตร 1 มล.) หลังจากนั้นจะมีการเติมสารแขวนลอยแบคทีเรียที่ศึกษา 0.1 มล. ที่มีเซลล์แบคทีเรีย 10 6 -10 7 เซลล์ต่อ 1 มล. ในการเจือจางแต่ละครั้ง เติมน้ำซุป 1 มล. และสารแขวนลอยแบคทีเรีย 0.1 มล. ลงในหลอดสุดท้าย (การควบคุมการเพาะเลี้ยง) การเพาะเชื้อจะถูกฟักที่อุณหภูมิ 37 °C จนถึงวันถัดไป หลังจากนั้นจะบันทึกผลการทดลองความขุ่นของอาหารเลี้ยงเชื้อ เปรียบเทียบกับกลุ่มควบคุมการเพาะเลี้ยง หลอดสุดท้ายที่มีสารอาหารโปร่งใสบ่งชี้ถึงการชะลอการเจริญเติบโตของวัฒนธรรมแบคทีเรียที่ศึกษาภายใต้อิทธิพลของความเข้มข้นต่ำสุดในการยับยั้ง (MIC) ของยาปฏิชีวนะที่มีอยู่ในนั้น
การประเมินผลการพิจารณาความไวของจุลินทรีย์ต่อยาปฏิชีวนะนั้นดำเนินการตามตารางพิเศษสำเร็จรูปซึ่งมีค่าขอบเขตของขนาดเส้นผ่านศูนย์กลางของเขตยับยั้งการเจริญเติบโตสำหรับสายพันธุ์ที่ดื้อยาต้านทานปานกลางและอ่อนไหว เช่นเดียวกับค่า MIC ของยาปฏิชีวนะสำหรับสายพันธุ์ที่ดื้อยาและอ่อนไหว
สายพันธุ์ที่ละเอียดอ่อนรวมถึงสายพันธุ์ของจุลินทรีย์ที่ยับยั้งการเจริญเติบโตที่ความเข้มข้นของยาที่พบในซีรัมในเลือดของผู้ป่วยเมื่อใช้ยาปฏิชีวนะในปริมาณปกติ สายพันธุ์ที่ดื้อยาปานกลาง ได้แก่ สายพันธุ์ที่มีการยับยั้งการเจริญเติบโตต้องการความเข้มข้นที่สร้างขึ้นในซีรัมในเลือดเมื่อให้ยาในปริมาณสูงสุด เชื้อจุลินทรีย์มีความทนทาน ซึ่งยาจะไม่ยับยั้งการเจริญเติบโตที่ความเข้มข้นที่สร้างขึ้นในร่างกายเมื่อใช้ ปริมาณสูงสุดที่อนุญาต
การตรวจหายาปฏิชีวนะในเลือด ปัสสาวะ และของเหลวในร่างกายอื่นๆวางหลอดทดลองสองแถวในชั้นวาง หนึ่งในนั้นเตรียมการเจือจางของยาปฏิชีวนะอ้างอิง ในอีกทางหนึ่งคือของเหลวทดสอบ จากนั้นจึงเติมสารแขวนลอยของแบคทีเรียทดสอบที่เตรียมในอาหาร Hiss ที่มีกลูโคสลงในหลอดทดลองแต่ละหลอด ในการทดสอบเพนิซิลลิน เตตราไซคลีน และอีรีโทรมัยซินในของเหลวที่ใช้ทดสอบ เชื้อเอส. หลังจากการฟักไข่ของเชื้อที่ 37 °C เป็นเวลา 18-20 ชั่วโมง จะสังเกตผลของการทดลองเกี่ยวกับความขุ่นของตัวกลางและการย้อมสีด้วยตัวบ่งชี้เนื่องจากการสลายกลูโคสโดยแบคทีเรียทดสอบ ความเข้มข้นของยาปฏิชีวนะถูกกำหนดโดยการคูณการเจือจางสูงสุดของของเหลวทดสอบที่ยับยั้งการเจริญเติบโตของแบคทีเรียทดสอบด้วยความเข้มข้นต่ำสุดของยาปฏิชีวนะอ้างอิงที่ยับยั้งการเจริญเติบโตของแบคทีเรียทดสอบเดียวกัน ตัวอย่างเช่น หากการเจือจางสูงสุดของของเหลวทดสอบที่ยับยั้งการเจริญเติบโตของแบคทีเรียทดสอบคือ 1:1024 และความเข้มข้นต่ำสุดของยาปฏิชีวนะอ้างอิงที่ยับยั้งการเจริญเติบโตของแบคทีเรียทดสอบชนิดเดียวกันคือ 0.313 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร ผลิตภัณฑ์ของ 1024x0.313=320 µg/ml เป็นยาปฏิชีวนะแบบเข้มข้นใน 1 มล.
การกำหนดความสามารถของ S. aureus ในการผลิต beta-lactamaseในขวดที่มีเชื้อ Staphylococcus ที่ไวต่อยาเพนิซิลลิน 0.5 มล. ต่อวัน เติมของเหลวที่หลอมเหลว 20 มล. และทำให้เย็นลงที่อุณหภูมิ 45 ° C ผสมสารอาหารและเทลงในจานเพาะเชื้อ หลังจากที่วุ้นแข็งตัวแล้ว ดิสก์ที่บรรจุเพนิซิลลินจะถูกวางไว้ที่กึ่งกลางของจานบนพื้นผิวของตัวกลาง วัฒนธรรมที่ศึกษาจะถูกหว่านตามรัศมีของดิสก์ด้วยการวนซ้ำ การฉีดวัคซีนจะถูกฟักที่อุณหภูมิ 37 °C จนถึงวันถัดไป หลังจากนั้นจะบันทึกผลการทดลอง ความสามารถของแบคทีเรียที่ศึกษาในการผลิตเบตา-แลคทาเมสนั้นพิจารณาจากการมีอยู่ของสายพันธุ์มาตรฐานของสแตฟิโลคอคคัสที่อยู่รอบๆ วัฒนธรรมที่ศึกษาอย่างใดอย่างหนึ่ง (รอบๆ ดิสก์)
ส่งงานที่ดีของคุณในฐานความรู้เป็นเรื่องง่าย ใช้แบบฟอร์มด้านล่าง
นักศึกษา นักศึกษาระดับบัณฑิตศึกษา นักวิทยาศาสตร์รุ่นเยาว์ที่ใช้ฐานความรู้ในการศึกษาและการทำงานจะขอบคุณอย่างยิ่ง
โฮสต์ที่ http://www.allbest.ru/
โซดาใกล้เคียง
วิธีการกำหนดความไวต่อยาปฏิชีวนะ
การตีความผลความอ่อนไหว
จุลินทรีย์ที่ละเอียดอ่อน (อ่อนแอ)
จุลินทรีย์ต้านทาน (ทน)
จุลินทรีย์ที่มีความต้านทานปานกลาง (ระดับกลาง)
ยาปฏิชีวนะ
อวัยวะเป้าหมาย
วรรณกรรม
ปัจจุบันในทางปฏิบัติทางคลินิก มีสองหลักการในการสั่งจ่ายยาต้านแบคทีเรีย: เชิงประจักษ์และ etiotropic
ใบสั่งยาปฏิชีวนะเชิงประจักษ์โดยอาศัยความรู้เกี่ยวกับความอ่อนไหวตามธรรมชาติของแบคทีเรีย ข้อมูลทางระบาดวิทยาเกี่ยวกับความต้านทานของจุลินทรีย์ในภูมิภาคหรือโรงพยาบาล ตลอดจนผลการทดลองทางคลินิกที่มีการควบคุม ข้อได้เปรียบที่ไม่ต้องสงสัยของการสั่งยาเคมีบำบัดเชิงประจักษ์คือความเป็นไปได้ของการเริ่มต้นการรักษาอย่างรวดเร็ว นอกจากนี้ แนวทางนี้ยังช่วยลดต้นทุนการวิจัยเพิ่มเติมอีกด้วย
ใบสั่งยาเชิงประจักษ์ของยาปฏิชีวนะขึ้นอยู่กับความรู้เกี่ยวกับความอ่อนไหวตามธรรมชาติของแบคทีเรีย ข้อมูลทางระบาดวิทยาเกี่ยวกับการดื้อต่อจุลินทรีย์ในภูมิภาคหรือในโรงพยาบาล และผลการทดลองทางคลินิกที่มีการควบคุม
อย่างไรก็ตาม ด้วยความไม่มีประสิทธิภาพของการรักษาด้วยยาปฏิชีวนะอย่างต่อเนื่อง กับการติดเชื้อในโรงพยาบาล เมื่อเป็นการยากที่จะสันนิษฐานถึงเชื้อโรคและความไวต่อยาปฏิชีวนะ การบำบัดด้วย etiotropic จึงเป็นที่ต้องการ Etiotropic ใบสั่งยายาปฏิชีวนะเกี่ยวข้องกับการแยกสารติดเชื้อออกจากวัสดุทางคลินิกเท่านั้น แต่ยังรวมถึงการกำหนดความไวต่อยาปฏิชีวนะด้วย การรับข้อมูลที่ถูกต้องทำได้เฉพาะกับการดำเนินการลิงก์ทั้งหมดที่ถูกต้องเท่านั้น การวิจัยทางแบคทีเรีย: ตั้งแต่การนำวัสดุทางคลินิก การขนส่งไปยังห้องปฏิบัติการแบคทีเรีย การระบุเชื้อโรค การพิจารณาความไวต่อยาปฏิชีวนะ และการแปลผล
ใบสั่งยาทาง etiotropic ของยาปฏิชีวนะนั้นขึ้นอยู่กับการแยกสารติดเชื้อออกจากจุดโฟกัสของการติดเชื้อและการกำหนดความไวต่อยาปฏิชีวนะ
เหตุผลที่สองสำหรับความจำเป็นในการกำหนดความไวของจุลินทรีย์ต่อยาต้านแบคทีเรียคือการได้รับข้อมูลทางระบาดวิทยาเกี่ยวกับโครงสร้างการดื้อยาของเชื้อก่อโรคในชุมชนที่ได้มาและการติดเชื้อในโรงพยาบาล ในทางปฏิบัติ ข้อมูลเหล่านี้ถูกนำมาใช้ในการสั่งจ่ายยาปฏิชีวนะเชิงประจักษ์ เช่นเดียวกับการก่อตัวของสูตรยาในโรงพยาบาล
วิธีการกำหนดความไวต่อยาปฏิชีวนะ
วิธีการกำหนดความไวของแบคทีเรียต่อยาปฏิชีวนะแบ่งออกเป็น 2 กลุ่มคือวิธีการแพร่กระจายและการเจือจาง
การกำหนดความไวของแบคทีเรียต่อยาปฏิชีวนะ:
วิธีการแพร่กระจาย
ใช้แผ่นยาปฏิชีวนะ
ด้วยความช่วยเหลือของ E-tests
วิธีการเพาะพันธุ์
การผสมพันธุ์ในอาหารที่เป็นของเหลว (น้ำซุป)
เพาะเลี้ยงในวุ้น
ในการทดสอบความไวต่อการแพร่กระจายของดิสก์ แบคทีเรียแขวนลอยที่มีความหนาแน่นจำเพาะ (โดยปกติเทียบเท่ากับมาตรฐานความขุ่นของ McFarland 0.5) ถูกนำไปใช้กับพื้นผิววุ้นในจานเพาะเชื้อ จากนั้นจึงวางจานที่มียาปฏิชีวนะในปริมาณที่กำหนด การแพร่กระจายของยาปฏิชีวนะเข้าไปในวุ้นทำให้เกิดโซนการยับยั้งการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์รอบ ๆ แผ่นดิสก์ หลังจากการฟักตัวของถ้วยในเทอร์โมสตัทที่อุณหภูมิ 35 o -37 o C ในตอนกลางคืน ผลลัพธ์จะถูกนำมาพิจารณาโดยการวัดเส้นผ่านศูนย์กลางของโซนรอบดิสก์เป็นมิลลิเมตร (รูปที่ 1)
รูปที่ 1การกำหนดความไวของจุลินทรีย์โดยวิธีการแพร่กระจายของดิสก์
การหาค่าความไวของจุลินทรีย์โดยใช้การทดสอบ E ดำเนินการในลักษณะเดียวกับการทดสอบโดยวิธีการแพร่กระจายของดิสก์ ความแตกต่างคือแทนที่จะใช้ดิสก์ที่มียาปฏิชีวนะ ใช้แถบทดสอบ E ที่มีการไล่ระดับความเข้มข้นของยาปฏิชีวนะจากสูงสุดไปต่ำสุด (รูปที่ 2) ที่จุดตัดของเขตยับยั้งการเจริญเติบโตของวงรีกับแถบทดสอบ E จะได้รับค่าความเข้มข้นการยับยั้งขั้นต่ำ (MIC)
รูปที่ 2การกำหนดความไวของจุลินทรีย์โดยใช้การทดสอบ E
ข้อได้เปรียบที่ไม่อาจปฏิเสธได้ของวิธีการแพร่กระจายคือความง่ายในการทดสอบและประสิทธิภาพการทำงานในห้องปฏิบัติการทางแบคทีเรีย อย่างไรก็ตาม เนื่องจากการทดสอบ E มีค่าใช้จ่ายสูง จึงมักใช้วิธีการแพร่กระจายของดิสก์สำหรับงานประจำ
วิธีการเพาะพันธุ์อิงตามการใช้ความเข้มข้นของยาปฏิชีวนะแบบอนุกรมคู่จากสูงสุดไปต่ำสุด (เช่น ตั้งแต่ 128 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร, 64 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร เป็นต้น เป็น 0.5 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร, 0.25 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร และ 0.125 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร) ในกรณีนี้ ยาปฏิชีวนะในความเข้มข้นต่างๆ จะถูกใส่เข้าไปในอาหารที่เป็นของเหลว (น้ำซุป) หรือวุ้น จากนั้นจึงวางแบคทีเรียแขวนลอยที่มีความหนาแน่นที่กำหนดซึ่งสอดคล้องกับมาตรฐานความขุ่นของ McFarland ที่ 0.5 ลงในน้ำซุปที่ใช้ยาปฏิชีวนะหรือบนจานวุ้น หลังจากการฟักไข่ค้างคืนที่อุณหภูมิ 35 ประมาณ -37 ประมาณ C ผลลัพธ์ที่ได้จะถูกบันทึก การปรากฏตัวของจุลินทรีย์ในน้ำซุป (ความขุ่นของน้ำซุป) หรือบนพื้นผิวของวุ้นบ่งชี้ว่าความเข้มข้นของยาปฏิชีวนะนี้ไม่เพียงพอที่จะระงับการมีชีวิต เมื่อความเข้มข้นของยาปฏิชีวนะเพิ่มขึ้น การเติบโตของจุลินทรีย์จะลดลง ความเข้มข้นต่ำสุดครั้งแรกของยาปฏิชีวนะ (จากชุดของการเจือจางแบบอนุกรม) โดยที่การเจริญเติบโตของแบคทีเรียไม่ได้ถูกกำหนดด้วยสายตา ถือว่าเป็น ความเข้มข้นต่ำสุดในการยับยั้ง (MIC). MIC มีหน่วยวัดเป็น mg/l หรือ µg/ml (รูปที่ 3)
ความเข้มข้นต่ำสุดในการยับยั้ง (MIC) - ความเข้มข้นต่ำสุดของยาปฏิชีวนะ (mg/L หรือ µg/mL) ที่ยับยั้งการเจริญเติบโตของแบคทีเรียที่มองเห็นได้อย่างสมบูรณ์ในหลอดทดลอง
รูปที่ 3การกำหนดมูลค่าของ IPC โดยการเจือจางในตัวกลางธาตุอาหารเหลว
การตีความผลความอ่อนไหว
จากข้อมูลเชิงปริมาณที่ได้รับ (เส้นผ่านศูนย์กลางของเขตยับยั้งการเจริญเติบโตของยาปฏิชีวนะหรือค่า MIC) จุลินทรีย์จะถูกแบ่งออกเป็นกลุ่มที่มีความอ่อนไหว ต้านทานปานกลาง และต้านทาน (รูปที่ 4) เพื่อแยกความแตกต่างระหว่างความไว (หรือความต้านทาน) ทั้งสามประเภทนี้เรียกว่า ความเข้มข้นของขอบเขต(เบรกพอยต์) ของยาปฏิชีวนะ (หรือค่าขอบเขตของเส้นผ่านศูนย์กลางของโซนการยับยั้งการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์)
รูปที่ 4การตีความผลความไวต่อแบคทีเรียตามค่า MIC
ความเข้มข้นของเส้นขอบไม่ใช่ค่าคงที่ อาจมีการแก้ไขขึ้นอยู่กับการเปลี่ยนแปลงในความไวของประชากรจุลินทรีย์ ผู้เชี่ยวชาญชั้นนำ (นักเคมีบำบัดและจุลชีววิทยา) ซึ่งเป็นสมาชิกของคณะกรรมการพิเศษมีส่วนร่วมในการพัฒนาและแก้ไขเกณฑ์การตีความ หนึ่งในนั้นคือคณะกรรมการมาตรฐานห้องปฏิบัติการทางคลินิกแห่งชาติของสหรัฐอเมริกา (NCCLS) ในปัจจุบัน มาตรฐาน NCCLS ได้รับการยอมรับในโลกและใช้เป็นมาตรฐานสากลในการประเมินผลลัพธ์ของการกำหนดความไวของแบคทีเรียในการศึกษาทางจุลชีววิทยาและทางคลินิกแบบหลายศูนย์
มีสองวิธีในการตีความผลความอ่อนไหว: ทางจุลชีววิทยาและทางคลินิก การตีความทางจุลชีววิทยาขึ้นอยู่กับการวิเคราะห์การกระจายค่าความเข้มข้นของยาปฏิชีวนะที่ยับยั้งการมีชีวิตของแบคทีเรีย การตีความทางคลินิกขึ้นอยู่กับการประเมินประสิทธิผลของการรักษาด้วยยาปฏิชีวนะ
จุลินทรีย์ที่ละเอียดอ่อน (อ่อนแอ)
แบคทีเรียถือว่ามีความอ่อนไหวทางคลินิก (โดยคำนึงถึงพารามิเตอร์ในหลอดทดลอง) หากการติดเชื้อที่เกิดจากจุลินทรีย์เหล่านี้ได้รับการรักษาด้วยยาปฏิชีวนะขนาดมาตรฐานและมีผลการรักษาที่ดี
ในกรณีที่ไม่มีข้อมูลทางคลินิกที่เชื่อถือได้ การแบ่งย่อยเป็นหมวดหมู่ความอ่อนไหวจะขึ้นอยู่กับการบัญชีร่วมกันของข้อมูลในหลอดทดลองและเภสัชจลนศาสตร์ กล่าวคือ กับความเข้มข้นของยาปฏิชีวนะที่ทำได้ ณ บริเวณที่ติดเชื้อ (หรือในซีรัม)
จุลินทรีย์ต้านทาน (ทน)
แบคทีเรียจัดอยู่ในประเภทต้านทาน (ดื้อยา) เมื่อในการรักษาโรคติดเชื้อที่เกิดจากจุลินทรีย์เหล่านี้ ไม่มีผลจากการรักษาแม้ว่าจะใช้ยาปฏิชีวนะในปริมาณสูงสุดก็ตาม จุลินทรีย์ดังกล่าวมีกลไกการต้านทาน
จุลินทรีย์ที่มีความต้านทานปานกลาง (ระดับกลาง)
การดื้อยาปฏิชีวนะของจุลินทรีย์
ในทางคลินิก การดื้อต่อแบคทีเรียในระดับปานกลางนั้นบอกเป็นนัยหากการติดเชื้อที่เกิดจากสายพันธุ์ดังกล่าวสามารถมีผลการรักษาที่ต่างออกไป อย่างไรก็ตาม การรักษาอาจประสบผลสำเร็จหากใช้ยาปฏิชีวนะในปริมาณที่สูงกว่ามาตรฐาน หรือการติดเชื้ออยู่ในบริเวณที่ยาต้านแบคทีเรียสะสมในระดับความเข้มข้นสูง
จากมุมมองทางจุลชีววิทยา แบคทีเรียที่มีความต้านทานปานกลางรวมถึงประชากรย่อยที่สอดคล้องกับค่าของ MIC หรือเส้นผ่านศูนย์กลางของโซนระหว่างจุลินทรีย์ที่อ่อนแอและต้านทาน บางครั้งสายพันธุ์ที่มีความต้านทานปานกลางและแบคทีเรียที่ต้านทานจะรวมกันเป็นจุลินทรีย์ที่ต้านทานประเภทหนึ่ง
ควรสังเกตว่าการตีความทางคลินิกของความไวของแบคทีเรียต่อยาปฏิชีวนะนั้นมีเงื่อนไขเนื่องจากผลลัพธ์ของการรักษาไม่ได้ขึ้นอยู่กับกิจกรรมของยาต้านแบคทีเรียกับเชื้อโรคเท่านั้น แพทย์ทราบถึงกรณีที่มีการดื้อต่อจุลินทรีย์ตามการศึกษาในหลอดทดลอง ได้ผลทางคลินิกที่ดี ในทางกลับกัน ด้วยความไวของเชื้อโรค การบำบัดอาจไม่ได้ผล
ในสถานการณ์ทางคลินิกบางอย่างที่การทดสอบความไวต่อวิธีการทั่วไปไม่เพียงพอ ความเข้มข้นต่ำสุดในการฆ่าเชื้อแบคทีเรียจะถูกกำหนด
ความเข้มข้นขั้นต่ำในการฆ่าเชื้อแบคทีเรีย (MBC)- ความเข้มข้นต่ำสุดของยาปฏิชีวนะ (มก./ลิตร หรือ ไมโครกรัม/มล.) ซึ่งเมื่อศึกษาในหลอดทดลอง จะทำให้จุลินทรีย์ตาย 99.9% จากระดับเริ่มต้นภายในช่วงระยะเวลาหนึ่ง
ความเข้มข้นต่ำสุดในการฆ่าเชื้อแบคทีเรีย (MBC) คือความเข้มข้นต่ำสุดของยาปฏิชีวนะ (mg/L หรือ µg/mL) ซึ่งในการศึกษาในหลอดทดลอง ทำให้จุลินทรีย์ตาย 99.9% จากระดับเริ่มต้นภายในช่วงระยะเวลาหนึ่ง
ค่า MBC ใช้ในการบำบัดด้วยยาปฏิชีวนะที่มีผลต่อแบคทีเรียหรือในกรณีที่ไม่มีผลของการรักษาด้วยยาปฏิชีวนะในผู้ป่วยประเภทพิเศษ กรณีเฉพาะสำหรับการตรวจหา MCD อาจเป็น ตัวอย่างเช่น เยื่อบุหัวใจอักเสบจากแบคทีเรีย โรคกระดูกอักเสบ หรือการติดเชื้อทั่วไปในผู้ป่วยที่มีภาวะภูมิคุ้มกันบกพร่อง
โดยสรุป ฉันต้องการทราบว่าวันนี้ไม่มีวิธีการที่จะช่วยให้คาดการณ์ผลทางคลินิกของยาปฏิชีวนะในการรักษาโรคติดเชื้อได้อย่างแน่นอน อย่างไรก็ตาม ข้อมูลความอ่อนไหวสามารถใช้เป็นแนวทางที่ดีสำหรับแพทย์ในการเลือกและปรับการรักษาด้วยยาปฏิชีวนะ
ยาปฏิชีวนะ
ยาปฏิชีวนะ - สารชีวเคมีบำบัด (จุลินทรีย์ พืช สัตว์) แหล่งกำเนิดกึ่งสังเคราะห์หรือสังเคราะห์ to-rye ที่มีความเข้มข้นเล็กน้อยทำให้เกิดการยับยั้งการสืบพันธุ์หรือการตายของจุลินทรีย์และเซลล์เนื้องอกที่ไวต่อพวกมันในสภาพแวดล้อมภายใน (endosomatically) ของสิ่งมีชีวิตในสัตว์ ในบรรดา A. มีสารของโครงสร้าง acyclic, heterocyclic, อะโรมาติก, tetracycline เช่นเดียวกับ macrolides, quinolones, aminoglycosides, b-lactam, polypeptides เป็นต้น ตามทิศทางของการยับยั้ง, ต้านเชื้อแบคทีเรีย, เชื้อรา, ไวรัส, antiprotozoal, antitumor A. พวกมันสามารถออกฤทธิ์ได้แคบ (เช่น benzylpenicillin) ปานกลาง (เช่น ampicillin) หรือในวงกว้าง (เช่น aminoglycosides, tetracyclines) ความไวตามธรรมชาติของจุลินทรีย์ต่อ A. สัมพันธ์กับการมีอยู่ขององค์ประกอบเป้าหมาย โครงสร้าง ซึ่ง A. มีผลเสียหาย หรือการเชื่อมโยงเมตาบอลิซึม การบล็อกข้าวไรย์ และความต้านทานตามธรรมชาติ - โดยไม่มีเป้าหมายดังกล่าว ในจุลินทรีย์ ความพร้อมใช้งานต่ำของเป้าหมายดังกล่าวสำหรับความสัมพันธ์ที่อ่อนแอของ A. หรือ A. สำหรับเป้าหมาย เป้าหมายของ A. ส่วนใหญ่มักจะเป็นผนังเซลล์ โดยเฉพาะอย่างยิ่ง peptidoglycan, เยื่อหุ้มเซลล์ไซโตพลาสซึม, มักจะซึมซาบหรือเอนไซม์อื่น ๆ ที่อยู่ในนั้น, ไรโบโซม, ไมโทคอนเดรีย, โครงสร้างทางพันธุกรรมหรือแต่ละช่วงของโปรตีน, NK และการสังเคราะห์ไขมัน ขึ้นอยู่กับความสำคัญของเป้าหมายสำหรับการทำงานที่สำคัญของจุลินทรีย์ การย้อนกลับของความเสียหาย เช่นเดียวกับความเข้มข้นและเงื่อนไขของการกระทำ ยาปฏิชีวนะมีผลทางจุลชีพที่สิ้นสุดในการตายของวัตถุหรือผล microbostatic
ในกรณีหลัง การเจริญเติบโตและการสืบพันธุ์ของจุลินทรีย์ต่อหน้า A จะถูกระงับ การเปลี่ยนแปลงเป้าหมายของการดำเนินการ และ. นำไปสู่การพัฒนาความต้านทานของจุลินทรีย์ไปยัง And., ขอบสามารถขยายไปยังผู้อื่นได้เช่นกัน และ. ด้วยกลไกการออกฤทธิ์ที่คล้ายคลึงกัน กลไกอื่น ๆ ของความต้านทานต่อ A. ก็เป็นไปได้เช่นกัน - การสังเคราะห์เอนไซม์ที่ทำลาย A. (ตัวอย่างเช่น (b-lactamase ทำลายแหวน b-lactam ของ penicillins เปลี่ยนเป็นสารที่ไม่เป็นอันตรายต่อจุลินทรีย์) เช่นกัน เป็นการจำกัดการเข้าถึงของ A. ไปที่เป้าหมาย, ลดค่าการเผาผลาญของเป้าหมาย, การปล่อย A. จากเซลล์แบคทีเรียโดยระบบ eflux, การผลิตโมเลกุลเป้าหมายมากเกินไป การดื้อยาที่ได้รับอาจเกี่ยวข้องกับการเปลี่ยนแปลงในฟีโนไทป์หรือจีโนไทป์ของ จุลินทรีย์ ในการต้านทานฟีโนไทป์ ความต้านทานต่อ A เพิ่มขึ้นในประชากรส่วนใหญ่ ความต้านทานเป็นแบบปรับตัว ชั่วคราวในธรรมชาติ และเกิดจากปรากฏการณ์การกดขี่-ภาวะซึมเศร้าของยีนของโครโมโซมหรือพลาสมิด - หรือการกลายพันธุ์แบบหลายขั้นตอนในโครโมโซมหรือ R-plasmids ตลอดจนโดยการถ่ายโอน R-plasmid หรือบริเวณของโครโมโซมที่รับผิดชอบการดื้อยา โดยการคอนจูเกต การถ่ายทอด หรือการเปลี่ยนแปลงจากบุคคลที่มีความต้านทานไปสู่ความอ่อนไหว การโยกย้ายของยีนสามารถต้านทานได้ ty transposons ตามกฎแล้วการกลายพันธุ์และการถ่ายโอนสารพันธุกรรมทำให้เกิดความต้านทานต่อหนึ่งหรือสอง A. การถ่ายโอน R-plasmid มักจะมาพร้อมกับการก่อตัวของความต้านทานต่อสารต้านจุลชีพหลายชนิดต่อการปรากฏตัวของดังนั้น- เรียกว่า. สายพันธุ์ทนหลาย ในประชากรที่ไวต่อ A. ในตอนแรก มีการกลายพันธุ์หรือลูกผสมที่เสถียรเพียงตัวเดียว ในแหล่งอาศัยที่ไม่คัดเลือก พวกมันมักจะถูกกำจัด และในแหล่งอาศัยที่คัดเลือกมา นั่นคือ ในสภาพแวดล้อมที่มี A ที่สอดคล้องกันพวกเขาจะได้รับตำแหน่งที่โดดเด่นอย่างรวดเร็ว การเกิดขึ้นของประชากรจุลินทรีย์ที่ดื้อต่อ A. อาจเกิดจากการนำเข้าสู่ประชากรและการเลือกผู้อพยพที่ดื้อยาจากประชากรอื่น ปรากฏการณ์นี้มักพบในสถานพยาบาล
ผลรวมของสองหรือสาม A. ขึ้นอยู่กับกลไกของการกระทำของพวกเขาอาจมีผลรวม (สารเติมแต่ง) ต่ำกว่าผลรวม (ที่เป็นปฏิปักษ์) หรือสูงกว่าผลรวม (เสริมฤทธิ์กัน) ฤทธิ์ต้านจุลชีพของสิ่งเดียวกัน ก. มักจะไม่ตรงกันเสมอไปเมื่อทำการทดสอบในการทดลองในหลอดทดลองและในการรักษา b-nogo ซึ่งเกิดจากการกระตุ้นหรือการหยุดทำงานอันเป็นผลมาจากปฏิกิริยาเมแทบอลิซึมของจุลินทรีย์ในสภาวะที่ไม่เพียงพอซึ่งการกระทำของ A. เป็นที่ประจักษ์และความหลากหลายของประชากรจุลินทรีย์บนพื้นฐานของความต้านทานต่อ A. Klin การใช้งานของ A. มักจะซับซ้อนโดยผลกระทบที่เป็นพิษ การพัฒนาของการแพ้ยาการติดเชื้อขั้นสูงและรอง dysbacteriosis การปราบปรามของภูมิคุ้มกัน การตอบสนองการเปลี่ยนแปลงของโรคไปสู่รูปแบบเรื้อรังการติดเชื้อยา ความน่าจะเป็นของผลกระทบที่ก่อให้เกิดการก่อมะเร็งและก่อมะเร็งของ A บางชนิด มีการระบุไว้ การบรรลุผลการรักษาโดยไม่มีการพัฒนาของภาวะแทรกซ้อนเป็นไปได้หากปฏิบัติตามหลักการทางวิทยาศาสตร์ของเคมีบำบัดที่มีเหตุผล
อวัยวะเป้าหมาย
เสี่ยงมากต่อยาปฏิชีวนะในทางเดินอาหาร มันส่งผ่านองค์ประกอบของยาไปโดยสมบูรณ์ซึ่งมักจะนำไปสู่การระคายเคืองและการหยุดชะงักของจุลินทรีย์ตามธรรมชาติ คลื่นไส้, คลื่นไส้, อาเจียน, ท้องร่วงหรือท้องผูก - นี่คือปฏิกิริยาของระบบทางเดินอาหารต่อยา และจะคงอยู่จนกว่ายาจะหยุดและจุลินทรีย์จะกลับมาเป็นปกติ ยาปฏิชีวนะที่รับประทานในขณะท้องว่างนั้นยากต่อการรักษาเป็นพิเศษ โดยจะเข้าสู่กระเพาะและลำไส้โดยตรง ทำให้เกิดการระคายเคือง
ความรำคาญอีกอย่างที่เกิดขึ้นเมื่อทานยาปฏิชีวนะก็คือการแพ้ โดยทั่วไปแล้ว นี่ถือเป็นกระบวนการปกติในร่างกายมนุษย์ เนื่องจากเป็นไปไม่ได้เลยที่จะรับรู้ยาปฏิชีวนะตามปกติ การแพ้ดังกล่าวเรียกว่ายารักษาโรค และอาจมีความรุนแรงแตกต่างกันโดยสิ้นเชิง ตั้งแต่ผื่นเล็กๆ ไปจนถึงแผลเปิด หรืออาการบวมน้ำของ Quincke อันเนื่องมาจากภาวะช็อกจากอะนาไฟแล็กติก
กินยาปฏิชีวนะอันตราย อวัยวะภายใน. ความจริงก็คือตัวยาปฏิชีวนะเองมีผลเป็นพิษ เมื่อสะสมในร่างกายจะผ่านตับ ไต ม้าม เป็นพิษทั้งกับเชื้อโรคและเซลล์อวัยวะ ยาปฏิชีวนะอาจส่งผลต่อตับโดยเฉพาะอย่างยิ่งหากตับของผู้ป่วยไม่แข็งแรงในขณะที่เริ่มการรักษา ก็เช่นเดียวกันกับไต ยาปฏิชีวนะสามารถนำไปสู่ผลกระทบต่อไตซึ่งจะเป็นอันตรายต่อสุขภาพของมนุษย์โดยทั่วไป
พิษต่อระบบประสาทเป็นผลข้างเคียงที่เกิดจากยาปฏิชีวนะ อาการหูหนวก ตาบอด และแม้กระทั่งความผิดปกติของขนถ่ายสามารถพัฒนาได้ด้วยการใช้เตตราไซคลีนเพื่อการรักษา หรือยาในกลุ่มอะมิโนไกลโคไซด์ หากความเป็นพิษต่อระบบประสาทไม่แสดงออกมาในระดับวิกฤต อาจถูกจำกัดให้มีอาการวิงเวียนศีรษะเล็กน้อย ความหนักเบาที่ศีรษะ แต่ทรงพลังกว่า ผลข้างเคียง- นี่คือรอยโรคของหู, ตา, เส้นประสาทใบหน้าซึ่งอาจไม่ฟื้นตัวหลังจากสิ้นสุดยาหรือถอนตัว
วรรณกรรม
1. ปชช. มาตรฐานการปฏิบัติงานสำหรับการทดสอบความไวต่อยาต้านจุลชีพ อาหารเสริมตัวที่เก้า M100-S9.- 1999.- V.19.- N.1.
2. วิธีการกำหนดความไวของแบคทีเรียต่อสารต้านจุลชีพ EUCAST Definitive document // Clin Microbiol Infect.- 1998.- V.4.- P.291-296.
โฮสต์บน Allbest.ru
...เอกสารที่คล้ายกัน
การศึกษาสารเคมีบำบัดรวมกันเป็นกลุ่มยาปฏิชีวนะ การกระทำของยาที่เกิดขึ้นระหว่างการสังเคราะห์ทางชีวเคมีของจุลินทรีย์ ศึกษากลยุทธ์การรักษาด้วยยาปฏิชีวนะและวิธีเอาชนะการดื้อต่อยาปฏิชีวนะของจุลินทรีย์
การนำเสนอ, เพิ่ม 06/08/2017
เคมีบำบัดต้านจุลชีพ กลุ่มและคลาสของยาต้านจุลชีพ ยา. Etiotropic การบำบัดเชิงประจักษ์ การใช้ยาปฏิชีวนะเพื่อป้องกันโรค อัลกอริธึมการสั่งจ่ายยาปฏิชีวนะ การทดสอบความไวต่อยาปฏิชีวนะ
การนำเสนอเพิ่ม 11/23/2015
ผู้บุกเบิกยาปฏิชีวนะ การแพร่กระจายของยาปฏิชีวนะในธรรมชาติ บทบาทของยาปฏิชีวนะในจุลินทรีย์ตามธรรมชาติ การกระทำของยาปฏิชีวนะที่เป็นแบคทีเรีย ความต้านทานต่อแบคทีเรียต่อยาปฏิชีวนะ คุณสมบัติทางกายภาพยาปฏิชีวนะ การจำแนกประเภท
การนำเสนอเพิ่ม 03/18/2012
การจำแนกยาปฏิชีวนะตามกลไกการออกฤทธิ์ของผนังเซลล์ การศึกษาสารยับยั้งการทำงานของเยื่อหุ้มเซลล์ไซโตพลาสซึม การพิจารณาสเปกตรัมต้านจุลชีพของเตตราไซคลีน แนวโน้มการพัฒนาการดื้อต่อจุลินทรีย์ในปัจจุบันของโลก
บทคัดย่อ เพิ่มเมื่อ 02/08/2012
ประวัติการค้นพบยาปฏิชีวนะ กลไกการออกฤทธิ์ของยาปฏิชีวนะ การเลือกปฏิบัติของยาปฏิชีวนะ ดื้อยาปฏิชีวนะ. กลุ่มยาปฏิชีวนะหลักที่รู้จักกันในปัจจุบัน อาการไม่พึงประสงค์ที่สำคัญต่อยาปฏิชีวนะ
รายงานเพิ่ม 03.11.2009
แนวคิดเรื่องความไวเป็นความสามารถของร่างกายในการรับรู้การระคายเคืองจากสภาพแวดล้อมภายนอกและภายใน ลักษณะของการรับ หน้าที่ของเครื่องวิเคราะห์ ตัวรับประเภทหลัก การจำแนกทางคลินิกของความไวคุณสมบัติของประเภทที่ซับซ้อน
การนำเสนอ, เพิ่ม 04/26/2015
ทดสอบเพิ่ม 10/30/2009
ประวัติการค้นพบเพนิซิลลิน การจำแนกประเภทของยาปฏิชีวนะ คุณสมบัติทางเภสัชวิทยา เคมีบำบัด กระบวนการทางเทคโนโลยีได้รับยาปฏิชีวนะ ความต้านทานต่อแบคทีเรียต่อยาปฏิชีวนะ กลไกการออกฤทธิ์ของคลอแรมเฟนิคอล, แมคโครไลด์, เตตราไซคลีน
บทคัดย่อ เพิ่ม 04/24/2013
แหล่งที่มาของการได้รับยาปฏิชีวนะ การจำแนกตามทิศทางและกลไกของการกระทำทางเภสัชวิทยา สาเหตุของการดื้อยาปฏิชีวนะ หลักการรักษาด้วยยาปฏิชีวนะอย่างมีเหตุผล คุณสมบัติฆ่าเชื้อแบคทีเรียของเพนิซิลลินผลข้างเคียง
การนำเสนอเพิ่ม 11/16/2011
สารประกอบทางเคมีที่มีต้นกำเนิดทางชีวภาพที่มีผลเสียหายหรือทำลายล้างต่อจุลินทรีย์ในระดับความเข้มข้นต่ำมากตามหลักการของยาปฏิชีวนะ แหล่งที่มาของยาปฏิชีวนะและทิศทางของการกระทำทางเภสัชวิทยา
ด้วยการเปลี่ยนแปลงทางพยาธิสภาพ การตรวจด้วยสายตาของหลอดลมและหลอดลมทำให้คุณสามารถระบุและประเมิน:
1. การเปลี่ยนแปลงการอักเสบในเยื่อเมือก
2. การปรากฏตัวของสิ่งที่เรียกว่า tracheobronchial dyskinesia ของเยื่อเมือกของเยื่อเมือกของหลอดลมและหลอดลมขนาดใหญ่
3. เนื้องอกที่อ่อนโยนและร้ายกาจ;
4. องศาที่แตกต่างกันของการตีบของหลอดลม;
5. สิ่งแปลกปลอมของหลอดลมและหลอดลมขนาดใหญ่ (หลัก, ปล้อง, ย่อยน้อยกว่า);
6. ที่มาของอาการเลือดออกในปอด
การเปลี่ยนแปลงการอักเสบในเยื่อเมือก สัญญาณส่องกล้องของการเปลี่ยนแปลงการอักเสบในเยื่อเมือกของหลอดลมและหลอดลม (รูปที่ 2.42) รวมถึง: 1) ภาวะเลือดคั่งของเยื่อเมือก; 2) บวม; 3) การสะสมของเมือกหรือเมือกที่เป็นความลับแยกกัน (ด้วยโรคเยื่อบุโพรงมดลูกอักเสบจากโรคหวัด) หรือเนื้อหาที่เป็นหนองในหลอดลมของหลอดลม (ตัวอย่างเช่นมีเยื่อบุโพรงมดลูกอักเสบเป็นหนอง) สัญญาณหลังมีค่าการวินิจฉัยที่เป็นอิสระและสำคัญมากเนื่องจากบ่งบอกถึงกระบวนการที่เป็นหนองในปอดแม้ว่าจะไม่ได้เกิดจากโรคหลอดลมอักเสบเป็นหนองเสมอไป (หนองสามารถเข้าสู่หลอดลมจากเนื้อเยื่อถุงฝี ฯลฯ ) ภาพส่องกล้องดังกล่าวมักต้องมีการตรวจผู้ป่วยในเชิงลึกเพิ่มเติม
Tracheobronchial dyskinesiaสัญญาณส่องกล้องหลักของ tracheobronchial dyskinesia นั้นเพิ่มขึ้นอย่างมากเมื่อเทียบกับบรรทัดฐานของแอมพลิจูดของการเคลื่อนไหวของทางเดินหายใจของส่วนพังผืดของผนังหลอดลมและหลอดลมหลักและดังนั้นระดับของการหดตัวของทางเดินหายใจ
ด้วยดายสกินในระดับแรกทำให้หลอดลมและหลอดลมหลักตีบแคบได้ถึง 2/3 ของลูเมนในขณะที่ยังคงรูปแบบปกติ (โค้งมน) หรือการแบนของลูเมนบางส่วน (รูปที่ 2.43)
ระดับ Dyskinesia II นั้นมีลักษณะการปิดโดยสมบูรณ์ระหว่างการหายใจออกของส่วนหลังและส่วนหน้าของผนังเมมเบรนและการยุบตัวของรูของหลอดลมและหลอดลมอย่างมีนัยสำคัญ
Tracheobronchial dyskinesia สามารถพัฒนาในโรคปอดต่างๆ เพิ่มความต้านทานของหลอดลมและหลอดลมหลักอย่างมีนัยสำคัญในระหว่างการหายใจออกบังคับและทำให้การอุดตันทางเดินหายใจทางเดินหายใจรุนแรงขึ้น ควรจำไว้ว่าวิธีการเดียวที่เชื่อถือได้และราคาไม่แพงในการตรวจหา tracheobronchial dyskinesia คือการส่องกล้องตรวจหลอดลม
เนื้องอก ภาพส่องกล้องในเนื้องอกที่เป็นพิษเป็นภัยของปอดมีความหลากหลายมากและขึ้นอยู่กับธรรมชาติของการเติบโตของเนื้องอกก่อนอื่น ด้วยการเจริญเติบโตของ endobronchial ในรูของหลอดลมในกรณีส่วนใหญ่การเจริญเติบโตของเนื้อเยื่อเนื้องอกที่มีพื้นผิวเป็นหลุมเป็นบ่อของสีชมพูสีเทาหรือสีม่วงแดงจะมองเห็นได้ชัดเจน (รูปที่ 2.44) ด้วยการเติบโตของเนื้องอกในช่องท้องบนเยื่อเมือกของหลอดลมตามกฎแล้วสามารถตรวจพบสัญญาณทางอ้อมของเนื้องอกเท่านั้น: ความหนาของเยื่อเมือกในท้องถิ่นที่สำคัญการแทรกซึมของผนังหลอดลมพื้นผิวที่ไม่สม่ำเสมอและมีเลือดออกง่าย
สัญญาณการส่องกล้องตามที่อธิบายไว้ของเนื้องอก โดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อมีการเจริญเติบโตของเยื่อบุช่องท้อง ซึ่งตรวจพบโดยการตรวจด้วยสายตาของต้นไม้หลอดลมฝอย นั้นไม่จำเพาะเจาะจงและต้องมีการวินิจฉัยแยกโรคกับโรคปอดอื่นๆ ดังนั้นในทุกกรณีเมื่อในระหว่างการส่องกล้องตรวจหลอดลมมีความสงสัยเพียงเล็กน้อยเกี่ยวกับลักษณะเนื้องอกของการเปลี่ยนแปลงทางพยาธิวิทยาในหลอดลมจำเป็นต้องมีการตรวจชิ้นเนื้อเนื้อเยื่อตามด้วยการตรวจเนื้อเยื่อของวัสดุที่ได้รับ
ควรเน้นว่าด้วยการแปลตำแหน่งของเนื้องอกที่อยู่ห่างไกลจากหลอดลม subsegmental การตรวจสอบด้วยสายตาของต้นไม้ tracheobronchial ในระหว่างการส่องกล้องตรวจหลอดลมนั้นไม่ได้ให้ข้อมูล ในกรณีเหล่านี้ จำเป็นต้องใช้วิธีการอื่นในการรับวัสดุจากส่วนปลายของปอดสำหรับการตรวจเนื้อเยื่อและเซลล์วิทยา เช่น การล้างหลอดลมใต้เยื่อหุ้มเซลล์หรือของเหลวล้างหลอดลม-ถุงน้ำดี (BAL) อย่างไรก็ตาม เพื่อให้วิธีการเหล่านี้ในการรับวัสดุในระหว่างการส่องกล้องตรวจหลอดลมจะมีประสิทธิภาพมากที่สุด ผู้ตรวจการส่องกล้องจะต้องมีการมุ่งเน้นที่ดีในภาพทางคลินิกและทางรังสีวิทยาของโรค และการแปลเป็นภาษาท้องถิ่นที่เสนอและลักษณะของกระบวนการทางพยาธิวิทยาในปอด สิ่งนี้อธิบายบทบาทของการอภิปรายเบื้องต้นโดยละเอียดร่วมกันของโปรโตคอลที่เหมาะสมที่สุดสำหรับการตรวจหลอดลมโดยผู้มีส่วนได้ส่วนเสียสามฝ่าย ได้แก่ แพทย์ที่เข้ารับการรักษา นักรังสีวิทยา และแพทย์ส่องกล้อง การอภิปรายดังกล่าวมีความสำคัญอย่างยิ่งหากผู้ป่วยสงสัยว่ามีเนื้องอกในปอด
หลอดลมตีบ Bronchoscopy เผยให้เห็นการตีบของหลอดลมในระดับต่างๆ สำหรับระดับ I ของการตีบ การตีบของลูเมนของหลอดลมโดย 1/3 เป็นลักษณะเฉพาะ สำหรับระดับ II - สูงถึง 2/3 สำหรับระดับ III - มากกว่า 2/3 หลอดลมตีบมักเกิดจาก:
1. การเจริญเติบโตของเนื้องอก endobronchial และ peribronchial
2. วัณโรคหลอดลมที่ใช้งานอยู่
3. การเปลี่ยนแปลงของ cicatricial;
4. การบีบอัดภายนอก (บีบอัด) ของหลอดลมโดยต่อมน้ำเหลือง parabronchial หรือ mediastinal ที่ขยายใหญ่ขึ้นด้วย lymphogranulomatosis, tuberculous bronchoadenitis, sarcoidosis หรือการขยายตัวของหลอดเลือดแดงใหญ่โป่งพอง ฯลฯ
สิ่งแปลกปลอมของหลอดลม Bronchoscopy ยังเผยให้เห็นสิ่งแปลกปลอมของหลอดลมและหลอดลมขนาดใหญ่ (หลัก, ปล้อง, ย่อยน้อยกว่า) ด้วยนักส่องกล้องที่มีคุณสมบัติสูง งานนี้มักจะไม่ยากมาก อย่างไรก็ตาม ควรจำไว้ว่าการวินิจฉัยด้วยหลอดลมของสิ่งแปลกปลอมที่สำลักมามากกว่า 1–2 เดือนที่ผ่านมานั้นซับซ้อนโดยข้อเท็จจริงที่ว่ากระบวนการอักเสบที่เป็นหนองเกิดขึ้นอย่างรวดเร็วที่ตำแหน่งของพวกเขา และการเติบโตของเนื้อเยื่อเม็ดเล็กและความลับที่เป็นหนองมักจะปกคลุมร่างกายต่างประเทศ . ในกรณีเหล่านี้ จำเป็นต้องมีความทะเยอทะยานอย่างระมัดระวังในการหลั่งหนองและการพิจารณาข้อมูลทางคลินิกและข้อมูลการลบล้าง
ในบางกรณีสามารถตรวจพบก้อนนิ่ว (bronchiolitis) ในลูเมนของ lobar หรือ segmental bronchus ระหว่าง bronchoscopy ได้ ส่วนใหญ่มักเป็นหินปูนที่แทรกซึมเข้าไปในรูของหลอดลมโดยการเจาะจากต่อมน้ำเหลืองหลอดลมฝอยที่ได้รับผลกระทบจากวัณโรค การปรากฏตัวของ bronchiolitis ในลูเมนของหลอดลมนำไปสู่การพัฒนาของปฏิกิริยาการอักเสบที่รุนแรงและจากนั้นจะมีการเปลี่ยนแปลง cicatricial ส่งผลให้ลูเมนของหลอดลมตีบ (ตีบ)
เลือดออกในปอด Bronchoscopy อาจใช้เพื่อระบุแหล่งที่มาของการมีเลือดออกในปอด ดังที่คุณทราบ สาเหตุที่พบบ่อยที่สุดของภาวะแทรกซ้อนนี้คือ มะเร็งปอดที่เน่าเปื่อย วัณโรค และโรคหลอดลมอักเสบ ด้วยการตรวจ bronchoscopy ความเข้มของการตกเลือดในปอดจะถูกกำหนดเป็นอันดับแรก ด้วยการสูญเสียเลือดเล็กน้อย (น้อยกว่า 50 มล. ต่อวัน) ชั้นเลือดเล็ก ๆ หรือสิ่งสกปรกในเลือดในเนื้อหาที่เป็นเยื่อเมือกของหลอดลมมักพบบนผนังของหลอดลม (รูปที่ 2.45, a) ด้วยเลือดออกในปอดในระดับปานกลาง (มากถึง 200 มล. ต่อวัน) เลือดจะเติม lobar หรือหลอดลมปล้อง (รูปที่ 2.45, b) และมีเลือดออกมาก (มากกว่า 300 มล. ต่อวัน) lobar สองหรือมากกว่า (2.45, c ).
เนื่องจากส่วนใหญ่มักเป็นแหล่งที่มาของเลือดออกในปอดซึ่งอยู่ไกลจากกิ่งย่อยของหลอดลม bronchoscopy จำเป็นต้องมีการตรวจสอบอย่างละเอียดของกิ่งก้านของหลอดลมปล้องทั้งหมดเพื่อระบุการไหลเวียนของเลือดที่เป็นไปได้จากหนึ่งในนั้น การวิเคราะห์เบื้องต้นของข้อมูลทางรังสีวิทยา (เช่น สัญญาณของการบดบังปอดเป็นปล้องหรือ lobar) ทำให้สามารถเพิ่มประสิทธิภาพการค้นหาการส่องกล้องเพื่อหาแหล่งที่มาของเลือดออกในระหว่างการตรวจหลอดลมได้อย่างเหมาะสม
วิธีการแพร่กระจายจะขึ้นอยู่กับความสามารถของสารปฏิชีวนะในการแพร่กระจายเข้าไปในความหนาของวุ้นและทำให้เกิดความล่าช้า ยับยั้งหรือยับยั้งการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์ทดสอบ อัตราการแพร่กระจายของสารละลายยาปฏิชีวนะในวุ้นขึ้นอยู่กับลักษณะทางเคมีของสารเตรียม องค์ประกอบของตัวกลาง และค่า pH ของสารละลาย ความสำคัญบางประการคือค่า pH ของบัฟเฟอร์ซึ่งเตรียมสารละลายสำหรับการทำงานของยาปฏิชีวนะ ในเรื่องนี้เมื่อพิจารณาความไวของแบคทีเรียต่อยาปฏิชีวนะโดยการแพร่กระจายเป็นวุ้นควรปฏิบัติตามกฎต่อไปนี้สำหรับการทดลอง
1. ต้องทำการทดสอบกับสื่อขององค์ประกอบบางอย่าง เนื่องจากการแพร่กระจายของยาปฏิชีวนะจะแตกต่างกันขึ้นอยู่กับองค์ประกอบของสารอาหารวุ้น pH ของตัวกลางมีความสำคัญอย่างยิ่ง ดังนั้น สำหรับยาปฏิชีวนะ เช่น สเตรปโตมัยซิน และสเตรปโตทริซิน โซนของการยับยั้งการทดสอบจุลินทรีย์จะเพิ่มขึ้นเมื่อ pH ของสารตั้งต้นเพิ่มขึ้น สำหรับออรีโอมัยซินและเทอร์รามัยซินจะลดลง และสำหรับคลอโรมัยซิตินจะไม่เปลี่ยนแปลง
2. ความหนาแน่นของการฉีดวัคซีนของสิ่งมีชีวิตทดสอบต้องคงที่สำหรับการทดลองแต่ละชุด
3. ระยะเวลาในการสัมผัสกับยาปฏิชีวนะกับสื่อก่อนการฉีดวัคซีนของสิ่งมีชีวิตทดสอบควรคงที่เนื่องจากโซนการยับยั้งขึ้นอยู่กับเวลาที่สัมผัสกับยาปฏิชีวนะกับวุ้นและค่าของยาปฏิชีวนะต่างกันไม่เหมือนกัน นอกจากนี้ยังพบว่าระหว่างช่วงเวลาของการหว่านสิ่งมีชีวิตทดสอบกับช่วงเวลาที่งอกของมันนั้นช่วงเวลาหนึ่งจะผ่านไปในระหว่างที่ยาปฏิชีวนะยังคงแพร่กระจายเข้าไปในวุ้น
เพื่อให้ได้ข้อมูลเชิงปริมาณที่แม่นยำยิ่งขึ้นเกี่ยวกับความไวของจุลินทรีย์ต่อยาปฏิชีวนะโดยใช้วิธีการแพร่เชื้อ ขอแนะนำให้เตรียมยาล่วงหน้าเป็นวุ้นเป็นเวลา 20-24 ชั่วโมง
4. ความเข้มข้นของผู้รับการทดลองและสารละลายมาตรฐานยาปฏิชีวนะไม่ควรสูง สำหรับยาปฏิชีวนะที่มีความเข้มข้นต่ำเท่านั้น เส้นผ่านศูนย์กลางของโซนการยับยั้งการเจริญเติบโตจะเป็นสัดส่วนกับความเข้มข้นของยาปฏิชีวนะ ที่ความเข้มข้นสูงกว่าขีดจำกัดที่กำหนด เส้นผ่านศูนย์กลางของโซนจะเท่ากัน ตัวอย่างเช่น โซนจะเหมือนกันสำหรับสารละลายนีโอมัยซิน 5 และ 10% สารละลายสเตรปโตมัยซิน 10 และ 20% เป็นต้น
5. จานเพาะเชื้อที่ใช้สำหรับการทดลองควรมีก้นแบนและมีเส้นผ่านศูนย์กลางเท่ากัน เนื่องจากความหนาของชั้นวุ้นจะส่งผลต่อการแพร่กระจายของยาปฏิชีวนะ
ปัจจุบันได้มีการพัฒนาวิธีการต่างๆ ในการทดสอบยาปฏิชีวนะโดยวิธีแพร่เชื้อด้วยวิธีต่างๆ เหล่านี้รวมถึง: วิธีการเจาะ, ร่อง, กระบอกสูบ, บล็อก, ดิสก์, เม็ด ฯลฯ
วิธีการดิสก์กระดาษวิธีการของแผ่นกระดาษกรองสำหรับกำหนดกิจกรรมของสารปฏิชีวนะถูกเสนอโดย Lou, Skell และ Thornbury ในปี 1945 ซึ่งประกอบด้วยแผ่นกระดาษกรองที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้ววางบนพื้นผิวของจานวุ้นที่เพาะด้วยสิ่งมีชีวิตทดสอบ แผ่นดิสก์เปียกด้วยสารละลายยาปฏิชีวนะในปริมาณที่พอเหมาะ หรือมีแผ่นดิสก์ที่ชุบด้วยยาปฏิชีวนะจากอุตสาหกรรมของเรา
เทวุ้นสารอาหารเหลว 20 มล. ลงในจานเพาะเชื้อที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้ว ขนาดเส้นผ่านศูนย์กลาง 10 ซม. เพื่อให้ได้สนามหญ้าที่มีแบคทีเรียสม่ำเสมอ 1 มล. ของสารแขวนลอยที่ 2 พันล้านของวัฒนธรรมการทดสอบจะถูกเทลงบนพื้นผิววุ้นในจาน ของเหลวจะกระจายไปทั่วพื้นผิวของถ้วยอย่างสม่ำเสมอ ของเหลวส่วนเกินจะถูกดูดออกด้วยปิเปตปาสเตอร์ และวุ้นจะถูกทำให้แห้งในเทอร์โมสตัทหรือบนเดสก์ท็อปโดยปิดถ้วยไว้
บนพื้นผิวของวุ้นที่เพาะเชื้อในระยะ 2 ซม. จากขอบจานและต่อไป ในระยะห่างที่เท่ากันดิสก์กระดาษที่มียาปฏิชีวนะจะถูกจัดวางด้วยแหนบทีละแผ่น ที่ด้านล่างของถ้วย พวกเขาจารึกชื่อยาปฏิชีวนะที่ใช้ชุบดิสก์ ถ้วยจะถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 1 ชั่วโมงหลังจากนั้นจะถูกวางไว้ในเทอร์โมสตัทเป็นเวลา 16-18 ชั่วโมง ในการพิจารณาผลลัพธ์ เส้นผ่านศูนย์กลางของเขตยับยั้งการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์รอบ ๆ ดิสก์จะถูกกำหนดโดยใช้ไม้บรรทัดมิลลิเมตร เข็มทิศ กระดาษกราฟ หรือเครื่องวัดพิเศษ
การขาดการยับยั้งการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์บ่งชี้ถึงการดื้อยาของจุลินทรีย์ภายใต้การศึกษาต่อยาปฏิชีวนะนี้ โซนที่มีเส้นผ่านศูนย์กลางไม่เกิน 15 มม. แสดงถึงความไวต่อยาปฏิชีวนะที่อ่อนแอ โซนตั้งแต่ 15 ถึง 25 มม. พบได้ในจุลินทรีย์ที่ละเอียดอ่อน จุลินทรีย์ที่มีความไวสูงมีลักษณะเป็นโซนที่มีเส้นผ่านศูนย์กลางมากกว่า 25 มม.
วิธีกระบอกสูบวิธีนี้ใช้กระบอกสูบอะลูมิเนียมที่มีเส้นผ่านศูนย์กลางประมาณ 5 มม. ยาวประมาณ 10 มม. หรือเป็นแก้วที่ตัดจากท่อแล้วบัดกรีด้วยเปลวไฟที่ปลายทั้งสองข้าง กระบอกลายฉลุจะถูกวางบนพื้นผิวที่แช่แข็งของเมล็ดวุ้นในจานเพาะเชื้อด้วยจุลินทรีย์ที่ศึกษา จากนั้นจึงใส่ยาปฏิชีวนะหรือยาเจือจางหลายชนิดลงไป หลังจากการฟักไข่ในเทอร์โมสตัทจะมีการกำหนดขนาดเส้นผ่านศูนย์กลางของโซนที่ขาดการเติบโตของสิ่งมีชีวิตทดสอบ
วิธีทรงกระบอกยังสามารถใช้ในการดัดแปลงต่อไปนี้: ขั้นแรกเทวุ้น 20 มล. ลงในจานเพาะเชื้อ หลังจากที่วุ้นเย็นตัวลง วุ้นอีก 5 มล. ที่มีสปอร์หรือเซลล์พืชของจุลินทรีย์ทดสอบจะถูกเทลงบนพื้นผิว และกระจายทั่วพื้นผิวทั้งหมดของชั้นแรกอย่างเท่าเทียมกันโดยการโยกเบาๆ หนึ่งชั่วโมงต่อมา เชื้อรูปทรงกระบอกที่ผ่านการฆ่าเชื้อแล้วจะถูกวางบนพื้นผิวของวุ้นแช่แข็งบนลายฉลุ จากนั้นจึงเติมยาปฏิชีวนะในปริมาณที่พอเหมาะ
วิธีร่องวุ้นเทลงในจานเพาะเชื้อที่ปลอดเชื้อและปล่อยให้แข็งตัว ตัดแถบกว้าง 1 ซม. ออกจากวุ้นแช่แข็งตามเส้นผ่านศูนย์กลางของถ้วย วุ้นที่ละลายแล้วซึ่งมีเปอร์เซ็นต์ของยาจะถูกเทลงในร่องที่เกิดขึ้น เมื่อวุ้นในร่องแข็งตัว จานเพาะเชื้อจะถูกวางในเทอร์โมสตัทเป็นเวลา 3-4 ชั่วโมง เพื่อให้ยากระจายตัวจากร่องออกสู่สิ่งแวดล้อม
วัฒนธรรมของแบคทีเรียถูกหว่านลงบนพื้นผิวของวุ้นด้วยจังหวะในแนวตั้งฉากกับร่องและข้ามจานทั้งหมดจากขอบหนึ่งไปอีกขอบหนึ่ง (รวมถึงร่อง) จากนั้นจานเพาะเชื้อจะถูกวางไว้ในเทอร์โมสตัทเพื่อพัฒนาแบคทีเรียที่อุณหภูมิที่เหมาะสมเป็นเวลา 20-24 ชั่วโมง
ผลลัพธ์ถูกนำมาพิจารณาด้วยความเข้มข้นของการเติบโต สายพันธุ์ต้านทานเติบโตไปจนถึงร่องและแม้กระทั่งบนพื้นผิว การเจริญเติบโตของวัฒนธรรมที่ไวต่อยาจะล่าช้าหรือหยุดที่ระยะต่าง ๆ จากร่อง ขึ้นอยู่กับระดับของความไว ระยะนี้สามารถวัดได้ด้วยไม้บรรทัดมิลลิเมตร
วิธีรูวุ้นในจานเพาะเชื้อได้รับการฉีดเชื้อจุลินทรีย์ทดสอบ ด้วยความช่วยเหลือของสว่านเผาสำหรับจุกปิดรูหลายรูจะถูกตัดในวุ้นซึ่งหลอมละลายหนึ่งหรือสองหยดและทำให้เย็นถึง 45 ° C วุ้นจะถูกเทลงในด้านล่าง จากนั้นจะมีการเจือจางยาปฏิชีวนะต่างๆ ในช่องที่เกิด ถ้วยวางในเทอร์โมสตัทเป็นเวลา 20-24 ชั่วโมง ระดับความไวของจุลินทรีย์ที่ทดสอบต่อยาปฏิชีวนะนั้นพิจารณาจากความกว้างของเขตยับยั้งการเจริญเติบโตที่แสดงเป็นมิลลิเมตร หรือโดยความเข้มข้นของสารในการเจือจางครั้งสุดท้ายซึ่งยังคงสามารถยับยั้งการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์ภายใต้ ศึกษา.
วิธีบล็อกวุ้นวิธีนี้เสนอโดย Egorov (1957) ส่วนใหญ่ใช้เพื่อศึกษาความสัมพันธ์ที่เป็นปฏิปักษ์ระหว่างจุลินทรีย์และประกอบด้วยดังต่อไปนี้ เทวุ้นสารอาหารเหลว 20-25 มล. ที่เหมาะสำหรับการเพาะปลูกศัตรูลงในจานเพาะเชื้อ เมื่อวุ้นแข็งตัว บล็อกจะถูกตัดออกด้วยสว่านจุกไม้ก๊อกที่ปราศจากเชื้อ (20-22 มม.) ซึ่งจะถูกย้ายด้วยมีดผ่าตัดที่ปราศจากเชื้อไปยังกึ่งกลางของจานอื่น ๆ หนึ่งอันสำหรับแต่ละจาน จากนั้นใส่ถ้วยที่มีบล็อกด้วยสารอาหารที่เหมาะสมที่สุดสำหรับการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์ทดสอบเพื่อให้บล็อกเพิ่มขึ้นเหนือระดับของสื่อ 1–1.5 มม. เมื่อวุ้นเซ็ตตัวแล้ว จานจะต้องแห้งเพื่อขจัดน้ำที่กลั่นตัวเป็นหยดน้ำ พื้นผิวของบล็อกวุ้นจะถูกเพาะด้วยวัฒนธรรมที่เป็นปฏิปักษ์ หลังจากการฟักตัวสองหรือสามวันหรือมากกว่านั้น สิ่งมีชีวิตทดสอบจะลายไปตามรัศมีของจานวุ้นในจาน หลังจากการฟักไข่ที่เหมาะสมเป็นเวลา 18–20 ชั่วโมง เพลตจะได้รับการตรวจสอบ
เพื่อตรวจสอบกิจกรรมยาปฏิชีวนะของ actinomycetes แนะนำให้ใช้วิธีการดัดแปลงของบล็อก agar ซึ่งประกอบด้วยความจริงที่ว่า actinomycete ถูกหว่านทันทีใน "สนามหญ้า" อย่างต่อเนื่องบนพื้นผิวของสื่อที่เหมาะสมสำหรับการพัฒนาและการก่อตัวของ สารปฏิชีวนะ จากนั้น บล็อกวุ้นจะถูกตัดออกจากตัวกลางที่แอคติโนมัยซีตีพัฒนาได้ดีและถ่ายโอนไปยังจานเลี้ยงเชื้อที่ปลอดเชื้อ หลังจากนั้นจึงเทลงในอาหารเลี้ยงเชื้อที่เย็นที่อุณหภูมิ 65–75°C ซึ่งเอื้ออำนวยต่อการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์ทดสอบ . เมื่อวุ้นแข็งตัว ถ้วยจะถูกวางในเทอร์โมสตัทเป็นเวลาหนึ่งวันเพื่อให้สารปฏิชีวนะที่เกิดจากแอคติโนมัยซีตมีเวลาในการแพร่กระจายสู่สิ่งแวดล้อม จากนั้นจุลินทรีย์ในการทดสอบจะถูกฉีดวัคซีนด้วยจังหวะในแนวรัศมี
วิธีแท็บเล็ตทำเนียบขาว (1961) เสนอวิธีการกำหนดคุณสมบัติต้านเชื้อแบคทีเรียของยาปฏิชีวนะและยาเคมีบำบัดอื่น ๆ โดยใช้ยาเม็ดที่ประกอบด้วยออกไซด์ 90% ของโลหะตั้งแต่หนึ่งชนิดขึ้นไป ได้แก่ ไททาเนียม เซอร์โคเนียม แฮฟเนียม ทอเรียมหรือซีเรียม และเซลลูโลส 10% วุ้นวุ้นเล็กน้อยถูกนำมาใช้สำหรับการผูก ในแท็บเล็ตในระหว่างการผลิตจะมีการเติมยาปฏิชีวนะหรือสารเคมีบำบัด เพื่อตรวจสอบกิจกรรมของพวกเขา แท็บเล็ตจะวางบนสนามหญ้าที่มีแบคทีเรียทดสอบ
Bene et al. (1962) ใช้วิธีการกดการเตรียมลงในยาเม็ดเพื่อตรวจสอบฤทธิ์ต้านแบคทีเรียของสารที่ละลายได้ไม่ดี สารดังกล่าวถูกกดด้วยแป้งในสัดส่วนที่ต่างกัน เม็ดยาที่ได้รับจะถูกวางลงบนพื้นผิวของวุ้นที่มีแบคทีเรียทดสอบ หลังจากการฟักไข่ พื้นที่ขนาดเล็กที่ปลอดเชื้อจะปรากฏขึ้นที่บริเวณที่ใช้ยาเม็ด ซึ่งแตกต่างกันไปตามเนื้อหาของสารในยาเม็ด
การใช้วุ้นสองชั้นเพื่อทดสอบฤทธิ์ต้านเชื้อแบคทีเรียของยาปฏิชีวนะ วุ้น 20 มล. (3%) ของมันฝรั่ง กะหล่ำปลีหรืออย่างอื่นที่จุลินทรีย์ทดสอบเติบโตได้ดีถูกเทลงในจานเพาะเชื้อ นี่คือชั้นแรก จากนั้นเมื่อวุ้นแข็งตัว ให้เทวุ้นอีก 5 มล. (1.5%) ลงไป ซึ่งจะมีการเติมแบคทีเรียแขวนลอยในอัตรา 1 มล. ของสารแขวนลอยของแบคทีเรียต่ออาหาร 100 มล. ซึ่งประกอบด้วยเซลล์แบคทีเรีย 1 พันล้านเซลล์ (ชั้นที่สอง). หลังจากที่ชั้นที่สองแข็งตัวแล้วหลุมจะถูกทำขึ้นด้วยการชกซึ่งยาปฏิชีวนะจะหยดลง
วิธีการกำหนดการกระทำของแบคทีเรียของการใช้ยาปฏิชีวนะร่วมกัน เพื่อศึกษาความไวของแบคทีเรียต่อการใช้ยาปฏิชีวนะร่วมกัน ใช้วิธีแพร่เชื้อวุ้น ด้วยเหตุนี้จึงใช้แถบกระดาษที่ชุบด้วยยาปฏิชีวนะและวางบนพื้นผิวของวุ้นที่ทำมุมให้กันและกัน ผลลัพธ์ที่ได้จะแสดงเป็นภาพกราฟิกโดยใช้เส้นโค้ง ซึ่งบางชนิดแสดงถึงผลเสริมฤทธิ์กัน รวมหรือเป็นปฏิปักษ์กันของยาปฏิชีวนะสองชนิด
การกำหนดความไวของแบคทีเรียต่อยาปฏิชีวนะโดยใช้กล้องจุลทรรศน์แบบเฟสคอนทราสต์ วิธีการกำหนดความไวของแบคทีเรียต่อยาปฏิชีวนะอย่างรวดเร็วนั้นขึ้นอยู่กับหลักการสังเกตแบคทีเรียที่มีชีวิตในกล้องจุลทรรศน์แบบ Phase-Contrast วัฒนธรรมการทดสอบแบคทีเรียถูกนำไปใช้กับจานเพาะเชื้อที่มีวุ้นในช่องท้อง 3% กระดาษกรองสี่หรือห้าวงกลมที่ชุบด้วยยาปฏิชีวนะหลายชนิดถูกวางบนพื้นผิวของสื่อ หลังจากผ่านไป 3-5 ชั่วโมง โดยใช้กล้องจุลทรรศน์คอนทราสต์แบบเฟส คุณสามารถกำหนดโซนการยับยั้งการเจริญเติบโตของแบคทีเรียได้ ในเขตการยับยั้งการเจริญเติบโตจะพบเฉพาะแบคทีเรียแต่ละชนิดเท่านั้นในขณะที่สังเกตการก่อตัวของจุลินทรีย์ทั่วไปภายนอก
