รูปที่ 14 รูปร่างของอาณานิคม:

รอบๆ; b - กลมมีขอบสแกลลอป ใน- กลมด้วยลูกกลิ้งตามขอบ d, d -เหง้า; e - กลมมีขอบเหง้า; g - อะมีบา; h - filiform; และ - พับ; k - ผิด; l- ศูนย์กลาง; ม. - คอมเพล็กซ์

แยกแยะ: 1) โคโลนีทรงหยดน้ำและทรงโดมของโคโลนีที่ถูกต้อง ทรงกลมด้วยระดับความนูนที่แตกต่างกัน ซึ่งในแนวตั้งแสดงถึงส่วนของลูกบอลและแตกต่างกันเฉพาะในความยาวของรัศมี โคโลนีนูนเล็กน้อยและมีรัศมีกว้าง โดม - เล็กกว่า;

2) โคโลนีเป็นพลาโนนูนที่มียอดแบนลาดเบา ๆ หรือขอบแตกอย่างกะทันหัน มีรูปร่างสี่เหลี่ยมคางหมูในแนวตั้ง

3) โคโลนีรูปกรวยมีรูปสามเหลี่ยมในแนวตั้ง:

4) โคโลนีที่มีส่วนตรงกลางยกขึ้นในรูปแบบของหัวนมและลูกกลิ้งตามแนวขอบ

5) อาณานิคมที่มีศูนย์หดหู่

6) โคโลนีแบนราบคืบคลานไปตามพื้นผิวของตัวกลาง ตรวจสอบพื้นผิวของอาณานิคมด้วยแว่นขยายหรือภายใต้กล้องจุลทรรศน์ที่กำลังขยายต่ำ พื้นผิวของโคโลนีเป็นด้านหรือเงาด้วยความมัน แห้งหรือเปียก เรียบหรือหยาบ โคโลนีที่เรียบถูกกำหนดด้วยตัวอักษร S (เรียบ) หยาบ - ด้วยตัวอักษร R (หยาบ) ซึ่งหมายถึง "เรียบ" และ "หยาบ" ตามลำดับ กลไกของการก่อตัวของโคโลนีในรูปแบบเรียบและหยาบนั้นเกิดจากความแตกต่างในกระบวนการแบ่งเซลล์ เซลล์จุลินทรีย์ในโคโลนีรูป S ตั้งอยู่ โดยสัมผัสพื้นผิวด้านข้าง เซลล์รูป R รักษาสะพานไซโตพลาสมิกไว้ในระหว่างการแบ่งตัว สร้างสายโซ่ที่ทับซ้อนกัน ทำให้เกิดพื้นผิวที่ขรุขระ และขอบของอาณานิคมไม่เท่ากัน

สังเกตการเปลี่ยนรูป S ไปเป็นรูปแบบ R ในระหว่างการแยกตัว ปรากฏการณ์ของการแตกตัวในจุลินทรีย์ที่ทำให้เกิดโรคนั้นสังเกตได้ภายใต้อิทธิพลของยาปฏิชีวนะและเคมีบำบัดปัจจัยภูมิคุ้มกันเฉพาะที่เกิดขึ้นระหว่างกระบวนการติดเชื้อรวมถึงปัจจัยด้านสิ่งแวดล้อม ในบรรดารูปแบบคร่าวๆของอาณานิคม ได้แก่ พับ, หมุน, ในลักษณะที่คล้ายกับพื้นผิวของสมองที่บิดเบี้ยวด้วยการโน้มน้าวใจ; กระปมกระเปา, ศูนย์กลางหรือเส้นรัศมี; shagreen คือเนื้อละเอียด

สีอาณานิคม กำหนดโดยเม็ดสีที่ผลิตโดยวัฒนธรรมของจุลินทรีย์ แบคทีเรียก่อโรคส่วนใหญ่ไม่ได้สร้างเม็ดสี อันเป็นผลมาจากการที่โคโลนีของพวกมันไม่มีสีหรือมีสีขุ่นคล้ายน้ำนม คล้ายกับโอปอล ในแสงที่ส่องผ่าน อาณานิคมดังกล่าวมีความโปร่งใสไม่มากก็น้อย จุลินทรีย์ที่สร้างเม็ดสีให้อาณานิคมของสีต่างๆ: ครีม, เหลือง, ส้มทอง, น้ำเงิน, แดง, ม่วง, ดำ, ฯลฯ

โครงสร้างอาณานิคม กำหนดในแสงส่องผ่านที่กำลังขยายด้วยกล้องจุลทรรศน์ต่ำ รูรับแสงแคบ หรือด้วยคอนเดนเซอร์ที่ต่ำลงเล็กน้อย ในโคโลนีสีและโคโลนีที่ไม่ส่งแสงจะไม่ถูกกำหนด

โดยธรรมชาติของโครงสร้างอาณานิคมประเภทต่อไปนี้มีความโดดเด่น:

1) ไฮยาลิน - ไม่มีสี โปร่งใส ไม่มีโครงสร้างที่ชัดเจน

2) เม็ดเล็กซึ่งขึ้นอยู่กับขนาดของเมล็ดพืชแบ่งออกเป็นเม็ดละเอียดและเนื้อหยาบ

3) เส้นใยหรือเส้นใยมีลักษณะเป็นเส้นใยยาวพันกันหนาแน่นในความหนาของอาณานิคม

อาณานิคมเป็นเนื้อเดียวกันหรือต่างกัน โครงสร้างของอดีตจะเหมือนกันทุกส่วน ในส่วนหลังส่วนกลางแตกต่างจากส่วนปลาย หรือแต่ละส่วนมีโครงสร้างที่ไม่เหมือนกับมวลส่วนอื่นๆ

ความสม่ำเสมอของอาณานิคม ซึ่งกำหนดสถานะทางกายภาพนั้นตรวจสอบโดยการสัมผัสหรือนำส่วนหนึ่งของวัสดุจากมันด้วยห่วงแบคทีเรีย โดยธรรมชาติของความสม่ำเสมอของอาณานิคมคือ:

1) เป็นแป้งเปียก ลอกออกได้ง่าย และกัดเซาะบนพื้นผิวของสารอาหาร เช่น เนย

2) หนืดหรือเมือกติดและเอื้อมมือ;

3) เส้นใยหรือหนังเหนียวหนาแน่นลบออกจากพื้นผิวของสารอาหารในรูปแบบของฟิล์มยืดหยุ่นที่สอดคล้องกับขนาดและรูปร่างของอาณานิคม

4) ห่วงแห้งแตกเปราะบางเมื่อสัมผัส

คุณสมบัติของการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์บนตัวกลางธาตุอาหารเหลวสำหรับสารอาหารที่เป็นของเหลว ธรรมชาติของการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์มีความหลากหลายน้อยกว่าอาหารที่เป็นของแข็ง อย่างไรก็ตาม มีการระบุรูปแบบของการเจริญเติบโตของแบคทีเรียต่อไปนี้ด้วย

1. การเจริญเติบโตของแบคทีเรียที่มีความขุ่นสม่ำเสมอของตัวกลาง ซึ่งสียังคงไม่เปลี่ยนแปลงหรือเปลี่ยนแปลงตามสีของเม็ดสีที่ละลายน้ำได้ซึ่งเกิดขึ้นในวัฒนธรรมของจุลินทรีย์ การเจริญเติบโตดังกล่าวเป็นลักษณะเฉพาะของแบคทีเรียก่อโรคหลายชนิดที่อยู่ในกลุ่มของจุลินทรีย์แบบไม่ใช้ออกซิเจน

2. การเจริญเติบโตของสัตว์หน้าดิน แบคทีเรียมีลักษณะเฉพาะโดยการก่อตัวของตะกอนที่ด้านล่างของหลอดทดลองที่มีสารอาหารที่เป็นของเหลว ตะกอนอาจมีจำนวนน้อยหรือมาก ร่วน เป็นเนื้อเดียวกัน มีเส้นใยหรืออยู่ในรูปแบบของสะเก็ดหลวมขนาดใหญ่ หนืด ลื่นไหล เปราะหรือซีดจางในความสม่ำเสมอ ธาตุอาหารเหนือตะกอนอาจจะใสหรือมีเมฆมาก สีของตะกอนและตัวกลางด้านบนนั้นพิจารณาจากการมีอยู่ของเม็ดสีที่เกิดจากการเพาะเลี้ยงจุลินทรีย์ หากวัฒนธรรมไม่ก่อให้เกิดเม็ดสี สีของตัวกลางจะไม่เปลี่ยนแปลง และตะกอนจะกลายเป็นสีเทาอมเทาหรือ สีเหลือง. การเจริญเติบโตด้านล่างนั้นจำเพาะสำหรับแบคทีเรียที่มีการหายใจแบบไม่ใช้ออกซิเจน

3. การเจริญเติบโตข้างขม่อม แบคทีเรียแสดงออกในความจริงที่ว่าสารอาหารในหลอดทดลองยังคงโปร่งใสอย่างสมบูรณ์ แบคทีเรียเติบโตก่อตัวเป็นสะเก็ดหลวมขนาดใหญ่ไม่มากก็น้อยหรือในทางกลับกันเม็ดเล็ก ๆ ที่ติดอยู่กับพื้นผิวด้านในของผนังหลอดเลือดซึ่งขึ้นอยู่กับชนิดของแบคทีเรียพวกมันจะถูกลบออกได้ง่ายหรือยาก

4. การเจริญเติบโตของพื้นผิว แบคทีเรียมีลักษณะเฉพาะโดยการปรากฏตัวของฟิล์มบนพื้นผิวของสารอาหารที่เป็นของเหลว ลักษณะและลักษณะอาจแตกต่างกัน:

ก) ฟิล์มมีความบาง ละเอียดอ่อน ไม่มีสี มีลักษณะเป็นคราบพลัคที่แทบจะสังเกตไม่เห็นที่หายไปเมื่อเขย่าหลอดและตัวกลางถูกกวน

ข) ฟิล์มมีความชื้น หนา มองเห็นได้ด้วยตาเปล่าชัดเจน มีความหนืด เหนียวข้น ติดที่ห่วงและเหยียดไปทางด้านหลัง

c) ฟิล์มมีความหนาแน่น แห้ง ดูเหมือนชิ้นส่วนของผิวหนัง และเมื่อคุณพยายามนำวัสดุออกจากฟิล์ม ฟิล์มจะถูกลบออกทั้งหมดในรูปแบบของจานกลมที่สอดคล้องกับเส้นผ่านศูนย์กลางของหลอดทดลอง:

d) ฟิล์มมีความหนาแน่น แห้ง มีรอยย่นและบางครั้งก็มีพื้นผิวที่กระปมกระเปาติดกับผนังของเรือด้วยขอบ เมื่อเขย่าของเหลวหรือสัมผัสวงแบคทีเรีย มันจะแตกเป็นชิ้น ๆ ที่จมลงไปในระดับความลึกของของเหลว

สีของฟิล์ม เช่นเดียวกับสื่อการเจริญเติบโต ขึ้นอยู่กับเม็ดสีที่เกิดจากวัฒนธรรมการเติบโตของจุลินทรีย์ การเจริญเติบโตของแบคทีเรียในรูปของฟิล์มพื้นผิวเป็นลักษณะของจุลินทรีย์แอโรฟิลิก

การเจริญเติบโตบนสารอาหารกึ่งของเหลวเพื่อระบุลักษณะของการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์บนอาหารกึ่งของเหลว วัฒนธรรมภายใต้การศึกษาจะถูกเพาะในคอลัมน์ของวุ้นกึ่งของเหลว 0.2-0.5% เพื่อให้ลักษณะของการเจริญเติบโตปรากฏอย่างชัดเจนที่สุด การเจาะของสื่อจะทำใกล้กับผนังของหลอดทดลอง การหว่านในลักษณะนี้ทำให้สามารถระบุเผ่าพันธุ์เคลื่อนที่ของจุลินทรีย์และแยกความแตกต่างจากจุลินทรีย์ที่ไม่สามารถเคลื่อนที่ได้

จุลินทรีย์เคลื่อนที่ในคอลัมน์ของวุ้นกึ่งของเหลวทำให้เกิดความขุ่นเด่นชัด โดยจะกระจายไปทั่วความหนาทั้งหมดของตัวกลางมากหรือน้อยเท่าๆ กัน

รูปแบบที่เคลื่อนที่ไม่ได้ของจุลินทรีย์จะเติบโตตามรอยเจาะของตัวกลางเท่านั้น ซึ่งคล้ายกับแท่งน้ำแข็งทรงกระบอกหรือทรงกรวย ในขณะเดียวกัน สิ่งแวดล้อมยังคงโปร่งใสอย่างสมบูรณ์

บทที่ 7 วิธีการศึกษาคุณสมบัติทางชีวเคมีของจุลินทรีย์

วัตถุประสงค์ของบทเรียน เพื่อศึกษาความแตกต่างทางชีวเคมีของจุลินทรีย์

วัสดุและอุปกรณ์ ชุดสารอาหาร ศึกษาวัฒนธรรมของจุลินทรีย์

วิธีการศึกษาคุณสมบัติทางชีวเคมีของจุลชีพ

เอนไซม์มีบทบาทสำคัญในชีวิตของจุลินทรีย์ พวกเขาเป็นผู้มีส่วนร่วมในปฏิกิริยาทางชีวเคมีต่างๆ ที่รองรับการทำงานของโภชนาการ การหายใจ และการสืบพันธุ์ จุลินทรีย์แต่ละชนิดสร้างชุดของเอ็นไซม์คงที่ ซึ่งบางชนิดสามารถย่อยสลายโปรตีนและคาร์โบไฮเดรตได้ในระดับต่างๆ ในขณะที่บางชนิดทำให้เกิดปฏิกิริยาออกซิเดชันและการลดลงของสารตั้งต้นต่างๆ ความเสถียรของระบบเอนไซม์ของแบคทีเรียทำให้สามารถใช้คุณสมบัติทางชีวเคมีของแบคทีเรียร่วมกับลักษณะทางสัณฐานวิทยา วัฒนธรรม และลักษณะคงที่อื่นๆ เพื่อระบุชนิดและชนิดของแบคทีเรียได้ ในการตรวจหาเอ็นไซม์ การเพาะเลี้ยงจุลินทรีย์ภายใต้การศึกษาจึงถูกเพาะบนสื่อสารอาหารเพื่อการวินิจฉัยแยกโรคแบบพิเศษ

คุณสมบัติ Saccharolytic ของจุลินทรีย์ ความสามารถในการย่อยสลายคาร์โบไฮเดรตและแอลกอฮอล์ที่มีอะตอมสูง ซึ่งมักจะรวมกันเป็นกลุ่มเดียวที่เรียกว่าน้ำตาล มีอยู่ในจุลินทรีย์หลายชนิด ภายใต้การกระทำของเอนไซม์ saccharolytic ของแบคทีเรีย น้ำตาลจะถูกย่อยสลายเป็นอัลดีไฮด์และกรด ผลิตภัณฑ์ขั้นสุดท้ายของการแยกสารคือสารที่เป็นก๊าซ: CO2 และ H2 เป็นลักษณะเฉพาะที่ ประเภทต่างๆและแม้แต่จุลินทรีย์หลายชนิดก็ใช้น้ำตาลชนิดเดียวกันต่างกัน ตัวอย่างเช่น แบคทีเรียบางชนิดที่หมักแลคโตส ยังคงเป็นกลางเมื่อเทียบกับกลูโคส แบคทีเรียอื่นๆ ตรงกันข้าม หมักกลูโคส และตัวที่สาม แอคทีฟมากที่สุด ทำให้เกิดการสลายตัวของทั้งกลูโคสและแลคโตส ในการตรวจหาเอนไซม์แซคคาโรไลติก วัฒนธรรมที่ศึกษาของแบคทีเรียจะถูกฉีดวัคซีนลงในอาหารเลี้ยงเชื้อ Hiss หรือที่เรียกว่าแถว "ที่แตกต่างกัน" แถว "Motley" Hiss แบบสั้นมักประกอบด้วยหลอดทดลอง 5 หลอด ได้แก่ กลูโคส แลคโตส แมนนิทอล มอลโตส และซูโครส ในการศึกษาบางชิ้น เพื่อศึกษาคุณสมบัติทางชีวเคมีของจุลินทรีย์ที่แยกได้ในเชิงลึก ชุด Hiss ได้รับการเสริมด้วย dulcitol, sorbitol, xylose, arabinose และน้ำตาลอื่นๆ ชื่อชุด "แตกต่าง" เกิดจากความจริงที่ว่าภายใต้การกระทำของเอนไซม์จุลินทรีย์คาร์โบไฮเดรตบางชนิดยังคงไม่เปลี่ยนแปลงดังนั้นสีของสารอาหารจึงไม่เปลี่ยนแปลงในขณะที่น้ำตาลอื่น ๆ สลายตัวทำให้เกิดผลิตภัณฑ์สลายตัวที่เป็นกรดที่เปลี่ยนไป สีของตัวบ่งชี้และดังนั้นสีของสารอาหาร สารฟ่อเป็นของเหลวและกึ่งของเหลว (โดยเติมวุ้นวุ้น 0.2-0.5%) ในหลอดทดลองที่มีสื่อของเหลวของ Giss เพื่อตรวจจับก๊าซซึ่งเป็นผลิตภัณฑ์สุดท้ายของการสลายตัวของน้ำตาล "ลอย" จะลดลง - หลอดที่มีเส้นผ่านศูนย์กลาง 0.5-0.7 ซม. ปิดผนึกที่ปลายด้านหนึ่ง "โฟลต" ถูกวางโดยปลายบัดกรี ในระหว่างการฆ่าเชื้อจะเต็มไปด้วยสารอาหาร เมื่อผลิตภัณฑ์ที่เป็นก๊าซก่อตัวขึ้นในตัวกลาง พวกมันจะแทนที่ส่วนหนึ่งของของเหลวใน "ลอย" ซึ่งเป็นผลมาจากการที่ฟองอากาศรวมตัวกันที่ปลายปิดผนึก ในตัวกลาง Hiss กึ่งของเหลว การก่อตัวของก๊าซจะถูกกำหนดโดยการมีอยู่ของฟองก๊าซขนาดเล็กในความหนาของตัวกลางและโฟมที่คงอยู่บนพื้นผิวของมัน ดังนั้นเมื่อศึกษาเอ็นไซม์ saccharolytic ที่หลั่งโดยจุลินทรีย์ เราไม่เพียงคำนึงถึงปรากฏการณ์ของการสลายน้ำตาลบางชนิดโดยการเกิดกรดเท่านั้น แต่ยังคำนึงถึงความลึกของกระบวนการของเอนไซม์ด้วยการปรากฏตัวของผลิตภัณฑ์ที่เป็นก๊าซในอาหาร หลอดทดลองพร้อมชุดสื่อ Hiss วางในชั้นวางในแถวเดียว หลอดทดลองแต่ละหลอดจะมีชื่อน้ำตาลที่บรรจุอยู่ในสื่อ ในหลอดทดลองแรกของแต่ละแถว นอกจากชื่อน้ำตาลแล้ว ให้ระบุจำนวนหรือประเภทของการเพาะเชื้อจุลินทรีย์ที่กำลังศึกษา นำวัฒนธรรมที่ปลายห่วงในปริมาณเล็กน้อยและหว่านตามวิธีที่ยอมรับโดยทั่วไป

คุณสมบัติสลายโปรตีนของจุลินทรีย์ จุลินทรีย์บางชนิดผลิตและหลั่งเอนไซม์สลายโปรตีนในสภาพแวดล้อมภายนอก - โปรตีเอสที่เร่งการสลายตัวของโปรตีน อันเป็นผลมาจากการแยกตัวของโมเลกุลโปรตีนทำให้เกิดผลิตภัณฑ์จากการย่อยสลายระดับโมเลกุลสูง - เปปโทน, อัลบูโมสและโพลีเปปไทด์ ภายใต้การกระทำของเอนไซม์โปรตีโอไลติกอื่น ๆ ในทางกลับกันเปปโทนจะถูกแยกออกเป็นโพลีเปปไทด์ (สารประกอบของกรดอะมิโนสองชนิดขึ้นไป) และกรดอะมิโนแต่ละตัว เพื่อระบุเอนไซม์โปรตีโอไลติก การเพาะเลี้ยงจุลินทรีย์ภายใต้การศึกษาจะถูกฉีดวัคซีนเข้าไปในอาหารที่มีโปรตีนอย่างน้อยหนึ่งชนิด ส่วนใหญ่มักใช้เจลาตินเพื่อจุดประสงค์นี้ไม่บ่อยนัก - หางนมข้น, ไข่ขาวที่จับเป็นก้อน, นมหรือเนื้อต้ม กิจกรรมการสลายโปรตีนของจุลินทรีย์ชนิดเดียวกัน เมื่อพิจารณาจากสารอาหารที่แตกต่างกัน จะแสดงออกมาแตกต่างกัน เนื่องจากความจำเพาะของเอนไซม์ ดังนั้นสำหรับจุลินทรีย์ประเภทต่างๆ แนะนำให้ใช้สารอาหารที่มีองค์ประกอบต่างกัน

การกำหนดกิจกรรมการย่อยโปรตีนของจุลินทรีย์

ก) เจลาติน เจลาตินเปปโตนเนื้อเทลงในหลอดทดลองในคอลัมน์ 5-6 มล. การหว่านทำได้โดยการฉีด จุ่มลูปกับวัฒนธรรมภายใต้การศึกษาลึกเข้าไปในอาหารเลี้ยงเชื้อจนถึงก้นหลอด จุลินทรีย์ที่สามารถเติบโตได้ที่อุณหภูมิต่ำจะถูกทิ้งไว้ในห้องที่อุณหภูมิ 20-22°C พืชที่เหลือจะถูกฟักในเครื่องควบคุมอุณหภูมิที่ 37 °C เมื่อรวมกับหลอดทดลองทดลองแล้ว หลอดทดลองหนึ่งหรือสองหลอดที่มีเจลาตินที่ไม่ได้ใส่เชื้อจะถูกวางในเทอร์โมสตัทเพื่อควบคุม ที่อุณหภูมิ 37 ° C เจลาตินจะละลาย ดังนั้นหลังจากฟักตัวแล้ว หลอดทดลองที่ถอดออกจากเทอร์โมสตัทจะถูกลดระดับลงในน้ำเย็นหรือใส่ในตู้เย็น หลังจากเจลาตินเจลาติไนเซชันในหลอดทดลองควบคุม พวกเขาเริ่มมองเห็นการเจริญเติบโตและคำนึงถึงการเปลี่ยนแปลงในตัวกลางธาตุอาหารของหลอดทดลอง โดยที่ภายใต้การกระทำของเอนไซม์เจลาติเนส โปรตีนเจลาตินถูกย่อยสลาย สารอาหารจะถูกทำให้เป็นของเหลว หลอดทดลองที่ตัวกลางยังคงไม่เปลี่ยนแปลงหลังจากการฟักตัวทุกวันทิ้งไว้ในเทอร์โมสตัท การเปลี่ยนแปลงในตัวกลางจะได้รับการตรวจสอบเป็นเวลา 20 วัน ในโปรโตคอลของการศึกษาจะต้องสังเกตวันที่ปรากฏสัญญาณของการทำให้เป็นของเหลวของตัวกลางระดับและลักษณะของการทำให้เป็นของเหลว

b) บนวุ้นนมไอค์มัน วุ้นนมของ Eikman ที่เทและแช่เย็นในจานเพาะเชื้อ ได้รับการเพาะเลี้ยงด้วยเชื้อจุลินทรีย์ที่ศึกษา การหว่านทำได้โดยใช้ห่วงหรือไม้พายเพื่อให้ได้อาณานิคมที่แยกได้ หลังจากการฟักไข่ในเทอร์โมสตัท 24-48 ชั่วโมง วัฒนธรรมที่ผลิตเอนไซม์โปรตีโอไลติกจะทำให้เกิดเปปโทไนเซชันของโปรตีนนม - เคซีน ซึ่งเป็นผลมาจากการสร้างโซนโปร่งใสรอบ ๆ อาณานิคมดังกล่าว ซึ่งโดดเด่นอย่างชัดเจนเมื่อเทียบกับพื้นหลังที่มีเมฆมากโดยทั่วไปของ ปานกลาง.

c) บนซีรั่มเลือดจับตัวเป็นลิ่ม วัฒนธรรมของจุลินทรีย์แอโรบิกที่ศึกษาได้รับการฉีดวัคซีนบนถ้วย ซึ่งเป็นจุลินทรีย์แบบไม่ใช้ออกซิเจน โดยฉีดเข้าไปในคอลัมน์ของซีรั่มม้าที่จับตัวเป็นก้อน บ่มในเทอร์โมสตัทที่อุณหภูมิ 37 °C สายพันธุ์ที่ผลิตเอนไซม์โปรตีโอไลติก เจือจางสารอาหาร ก่อให้เกิดการกดทับรอบๆ โคโลนีหรือบนพื้นผิวของคอลัมน์สื่อ

ง) ในน้ำซุปไก่ ไข่ขาว. ในหลอดทดลองที่มีน้ำซุปเนื้อเปปโทนหรือน้ำซุปของ Hottinger ที่มีโปรตีนไก่ที่พับไว้ จะมีการเพิ่มการเพาะเชื้อจุลินทรีย์หนึ่งวงภายใต้การศึกษา มีการดูพืชผลทุกวันเป็นเวลา 5 วัน การเพาะเลี้ยงจุลินทรีย์ที่ใช้งานโปรตีโอไลติกจะทำลายไข่ขาวที่จับตัวเป็นก้อน ชิ้นส่วนของโปรตีนที่บรรจุอยู่ในสื่อจะลดขนาดลงอย่างเห็นได้ชัด กลายเป็นมวลร่วนหรือละลายจนหมด ในทำนองเดียวกัน คุณสมบัติการย่อยโปรตีนของจุลินทรีย์จะปรากฏในสื่อที่มีเนื้อต้มชิ้นหนึ่ง

จุลินทรีย์ที่ทำให้เกิดโรคบางชนิดที่มีกิจกรรมการสลายโปรตีนที่เด่นชัดมีความสามารถในการทำลายโปรตีนและเปปโตนให้เป็นผลิตภัณฑ์ที่มีการสลายตัวลึก: อินโดล ไฮโดรเจนซัลไฟด์ ยูเรีย และแอมโมเนีย ในการพิจารณาประเภทและความแตกต่างของจุลินทรีย์ที่ทำให้เกิดโรค การระบุผลิตภัณฑ์สองรายการแรก: อินโดลและไฮโดรเจนซัลไฟด์มีความสำคัญมากที่สุด

การกำหนดอินโดลในการเพาะเชื้อจุลินทรีย์ อินโดลเกิดจากการสลายของกรดเฮเทอโรไซคลิกที่ซับซ้อน - ทริปโตเฟน ในการตรวจจับการก่อตัวของอินโดล วงจรของวัฒนธรรมภายใต้การศึกษาจะถูกฉีดวัคซีนลงในอาหารเลี้ยงเชื้อของ Strogoff หรือสื่ออื่นๆ ที่แนะนำสำหรับการตรวจจับอินโดล ทันทีหลังจากฉีดวัคซีน แถบกระดาษตัวบ่งชี้ที่ชุบด้วยสารละลายของกรดออกซาลิกจะถูกนำเข้าไปในหลอดทดลองเพื่อไม่ให้กระดาษตัวบ่งชี้สัมผัสกับสารอาหาร เมื่อต้องการทำเช่นนี้ แถบกระดาษที่สามบนถูกกดด้วยไม้ก๊อกที่ผนังของหลอดทดลอง พืชผลจะถูกฟักเป็นเวลา 24-48 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37°C การก่อตัวของอินโดลถูกกำหนดโดยสีของปลายล่างของกระดาษตัวบ่งชี้เป็นสีชมพูอ่อน ซึ่งมองเห็นได้ชัดเจนในแสงที่ส่องผ่าน

คำจำกัดความของไฮโดรเจนซัลไฟด์ ไฮโดรเจนซัลไฟด์เป็นผลพลอยได้จากการสลายกรดอะมิโน ได้แก่ ซีสทีน ซีสเตอีน และเมไทโอนีนที่มีกำมะถัน วงจรของการเพาะเชื้อจุลินทรีย์ที่ศึกษาจะถูกฉีดวัคซีนลงในหลอดทดลองด้วยน้ำซุปเนื้อเปปโตนหรือน้ำซุป Hottinger ทันทีหลังจากฉีดวัคซีน แถบกระดาษตัวบ่งชี้ที่ชุบด้วยตะกั่วอะซิเตทจะถูกเติมลงในหลอดทดสอบเพื่อตรวจวัดไฮโดรเจนซัลไฟด์ ในกรณีที่เป็นบวก ไฮโดรเจนซัลไฟด์ที่เกิดขึ้นในวัฒนธรรมจะรวมกับตะกั่วอะซิเตทที่ไม่มีสีและกลายเป็นตะกั่วซัลเฟต ซึ่งทำให้กระดาษตัวบ่งชี้มีสีน้ำตาลดำ

การบัญชีขั้นสุดท้ายของผลลัพธ์สำหรับการก่อตัวของอินโดลและไฮโดรเจนซัลไฟด์จะดำเนินการในวันที่ 7-10 หลังจากการหว่านเมล็ดเนื่องจากกระบวนการแตกแยกของเอนไซม์ของโปรตีนและการก่อตัวของผลิตภัณฑ์สุดท้ายของการสลายตัวบางครั้งเกิดขึ้นเป็นเวลานาน

คุณสมบัติรีดอกซ์ของจุลินทรีย์ เอนไซม์รีดอกซ์ที่เกี่ยวข้องกับการทำงานของระบบทางเดินหายใจของจุลินทรีย์ส่วนใหญ่สามารถพบได้ในการเพาะเลี้ยงเชื้อจุลินทรีย์ ดังที่ทราบกระบวนการของการเกิดออกซิเดชันของสารตั้งต้นสามารถเกิดขึ้นได้โดยการแนบออกซิเจนเข้ากับเอนไซม์ออกซิเดสหรือโดยการขจัดไฮโดรเจนออกจากมันด้วยการมีส่วนร่วมของเอนไซม์ดีไฮเดรส ปฏิกิริยาประเภทนี้มีลักษณะเฉพาะจากข้อเท็จจริงที่ว่าการเกิดออกซิเดชันของสารหนึ่งจะมาพร้อมกับการลด (รีดักชัน) ของสารอินทรีย์อื่นเสมอ สารแรกที่แยกไฮโดรเจนออกเรียกว่าผู้ให้และสารที่ติดอยู่เรียกว่าตัวรับ ตัวรับไฮโดรเจนส่วนใหญ่มักจะเป็นออกซิเจนในอากาศ แต่ก็สามารถเป็นสารประกอบอินทรีย์หลายชนิดที่สามารถออกซิไดซ์และลดลงได้ง่าย เพื่อที่จะระบุเอ็นไซม์ดีไฮเดรสและกำหนดกิจกรรมของพวกมันในการปฏิบัติของการวิจัยทางจุลชีววิทยา ได้มีการเสนอวิธีการบนพื้นฐานของการนำสีย้อมอินทรีย์เข้าไปในอาหารซึ่งทำหน้าที่เป็นตัวรับไฮโดรเจน เป็นผลมาจากการเติมไฮโดรเจน สีย้อมจะลดลง กลายเป็นสารประกอบไม่มีสีที่เรียกว่าลิวโคเบส ด้วยการเข้าถึงออกซิเจนอย่างมากมาย มันสามารถออกซิไดซ์อีกครั้งและได้สีเดิม เมทิลีนบลู, สารลิตมัสทิงเจอร์, มาลาไคต์กรีน, อินดิโก้คาร์มีน, สีแดงเป็นกลาง, ฯลฯ ถูกใช้เป็นตัวรับไฮโดรเจนเพื่อเผยให้เห็นคุณสมบัติการลดของจุลินทรีย์สีย้อมเหล่านี้จะถูกเพิ่มลงในสื่อสารอาหารตามปกติ: น้ำซุปเนื้อเปปโตนเนื้อเปปโตน วุ้น, นม. จุลินทรีย์ชนิดเดียวกันมีพฤติกรรมแตกต่างกันไปตามสีที่มีองค์ประกอบต่างกัน คุณสมบัติของจุลินทรีย์นี้ใช้ในทางปฏิบัติทางจุลชีววิทยาเป็นคุณลักษณะที่แตกต่างกัน แบคทีเรียไทฟอยด์ลดเมทิลีนบลูแต่ไม่ลดสารสีน้ำเงินและไม่เปลี่ยนสีแดงที่เป็นกลาง ตรงกันข้ามกับอีโคไลซึ่งยังคงเป็นกลางสำหรับเมทิลีนบลู แต่จะลดสารสีน้ำเงินและสีแดงที่เป็นกลาง

การกำหนดความสามารถในการลด

1. ในนมขนาดกลาง 5 มล. ที่มีเมทิลีนบลู - เพาะเลี้ยงวงจรของวัฒนธรรมที่ศึกษาจากอาหารที่มีความหนาแน่นสูงหรือ 0.1 มล. ของวัฒนธรรมน้ำซุป 18 ชั่วโมงและหลังจากฟักตัวหนึ่งชั่วโมงผลการเจริญเติบโตจะถูกนำมาพิจารณา . ด้วยปฏิกิริยาเชิงบวกต่อการลดลงของเมทิลีนบลู สื่อจะเปลี่ยนจากสีน้ำเงินเป็นสีครีม และด้วยปฏิกิริยาเชิงบวกเล็กน้อย สื่อดังกล่าวจะได้สีเขียว

2. หลอดทดลองที่มีนมลิตมัส อาหารของ Minkevich ได้รับการฉีดวัคซีนในลักษณะเดียวกับนมที่มีเมทิลีนบลู ซึ่งเป็นวัฒนธรรมประจำวันจากอาหารที่เป็นของแข็งหรือของเหลว พืชผลจะถูกฟักด้วยเทอร์โมสตัทเป็นเวลา 10 วัน โดยสังเกตการเปลี่ยนสีของอาหารทุกวัน การลดลงของสารสีน้ำเงินนั้นเกิดจากการเปลี่ยนสีของนมอย่างสมบูรณ์ซึ่งมีสีม่วงอมชมพูก่อนหว่าน ในโปรโตคอลการศึกษา การลดลงของสารสีน้ำเงินแสดงด้วยตัวอักษร P

สื่อของ Minkevich ยังทำให้สามารถตรวจจับการก่อตัวของกรดหรือด่างซึ่งแสดงออกตามลำดับในสีแดงหรือสีน้ำเงินของสภาพแวดล้อมของนม การก่อตัวของกรดแสดงด้วยตัวอักษร K, ด่าง - โดยตัวอักษร W.

ความมุ่งมั่นของเอนไซม์คาตาเลส จุลินทรีย์บางชนิดที่อยู่ในกลุ่มแอโรบิกในกระบวนการหายใจจะก่อตัวเป็นไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ซึ่งเป็นพิษต่อเซลล์ ปริมาณไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ในวัฒนธรรมไม่เคยมีความเข้มข้นสูง เนื่องจากเมื่อก่อตัวขึ้น เปอร์ออกไซด์จะถูกย่อยสลายเป็นน้ำและออกซิเจนระดับโมเลกุลด้วยการมีส่วนร่วมของเอนไซม์คาตาเลส บนพื้นผิวของการเพาะเลี้ยงจุลินทรีย์ที่ปลูกบนอาหารที่มีสารอาหารหนาแน่นในจานเพาะเชื้อ ใช้สารละลายไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ 1% 1-2 มล. เพื่อให้ครอบคลุมพื้นผิวของวัฒนธรรมด้วยชั้นบาง ๆ การปรากฏตัวของฟองก๊าซในชั้นของของเหลวที่ใช้บ่งบอกถึงการก่อตัวของออกซิเจนอันเป็นผลมาจากการแยกไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ภายใต้การกระทำของคาตาเลส ผลลัพธ์ที่คล้ายคลึงกันในโปรโตคอลของการทดลองถูกทำเครื่องหมายด้วยเครื่องหมาย + ซึ่งเป็นผลบวกของปฏิกิริยาต่อ catalase

บทที่ 8 วิธีการวิจัยทางจุลชีววิทยาของน้ำ อากาศ และดิน

เป้าบทเรียนทำความคุ้นเคยกับกฎการรับและส่งตัวอย่างน้ำและดินเพื่อการวิจัย กำหนดจำนวนจุลินทรีย์ที่มีชีวิตทั้งหมดใน 1 กรัมหรือ 1 มล. สำรวจอากาศโดยการตกตะกอน (วิธีของโคช)

อุปกรณ์และวัสดุขวดปลอดเชื้อพร้อมจุกปิด หลอดทดลองที่มีน้ำปราศจากเชื้อ 9 มล. ในแต่ละจานเลี้ยงเชื้อที่ห่อด้วยกระดาษ ปิเปตปลอดเชื้อ (อันละ 2 มล.) หลอดที่มี MPA หลอมเหลว หลอดละ 12 มล. ลูปทางจุลชีววิทยา สไลด์และใบปะหน้า สารละลายลูกอล น้ำมันซีดาร์. หัวเตา.

เทคนิคการหว่านจุลินทรีย์ วิธีการทางแบคทีเรีย - การแยกวัฒนธรรมบริสุทธิ์ของจุลินทรีย์และการจำแนกที่ตามมา - มีความสำคัญอย่างยิ่งในการวินิจฉัยโรคติดเชื้อในการศึกษาสถานะสุขอนามัยและสุขอนามัยของวัตถุสิ่งแวดล้อม (น้ำ, อากาศ, ดิน, อาหาร ) และการศึกษาตามตัวบ่งชี้ทาง epizootic และ epidemiological สำหรับการติดเชื้อจุลินทรีย์ที่ทำให้เกิดโรค อย่างไรก็ตาม ขั้นตอนแรกในเทคนิคนี้คือ การเพาะหรือฉีดซ้ำของการเพาะเชื้อแบคทีเรียบนอาหารประเภทต่างๆ

วัสดุสำหรับหว่านเมล็ดสามารถเพาะเลี้ยงแบคทีเรีย ขับถ่ายสัตว์และมนุษย์ต่าง ๆ เนื้อเยื่อของศพ น้ำ ดิน และอาหาร

วัสดุที่เป็นของเหลวสำหรับการหว่านเมล็ดจะใช้ห่วงหรือปิเปต เมื่อถ่ายด้วยลูป ของเหลวควรก่อตัวเป็นฟิล์มใสบาง ๆ ในวงแหวนของวงแหวน - "กระจก" ปิเปตจะใช้เมื่อมีการฉีดวัคซีนวัสดุในปริมาณมากหรือวัดได้อย่างแม่นยำ

ข้าว. สี่. แบบแผนการถ่ายโอนการเพาะเชื้อจุลินทรีย์จากหลอดทดลองไปยังหลอดทดลอง

วิธีการใช้วัสดุที่มีความหนาแน่นสูงนั้นพิจารณาจากความสม่ำเสมอ เมื่อหว่านเมล็ดมักใช้ห่วงแบคทีเรีย การจัดการทั้งหมดที่เกี่ยวข้องกับการหว่านและการแยกวัฒนธรรมจุลินทรีย์จะดำเนินการโดยใช้เปลวไฟ ลูปแบคทีเรียจะจุดไฟบนเปลวไฟทันทีก่อนนำวัสดุ จากนั้นลูปจะเย็นลง เมื่อต้องการทำเช่นนี้ เมื่อทำการเพาะเชื้อจุลินทรีย์จากหลอดทดลอง วงจรร้อนจะถูกจุ่มลงในของเหลวที่ควบแน่น และเมื่อทำการเพาะจากจานเพาะเชื้อ พวกมันจะสัมผัสพื้นผิวของสารอาหารที่ปราศจากการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์ วงจรที่ระบายความร้อนอย่างเพียงพอจะไม่ทำให้ของเหลวควบแน่นเกิดฟองและไม่ละลายวุ้นเมื่อสัมผัสกับตัวกลาง หลังจากการหว่านเสร็จสิ้น วงจะถูกเผาอีกครั้งเพื่อทำลายวัฒนธรรมจุลินทรีย์ที่อยู่บนนั้นหรือวัสดุที่ติดเชื้อจุลินทรีย์

ปิเปตและไม้พายที่ใช้สำหรับการหว่านเช่นเดียวกับลูปแบคทีเรียจะถูกเผาก่อนหว่านเมล็ดและหลังจากหยอดเมล็ดแล้วจะถูกจุ่มลงในสารละลายฆ่าเชื้อ

ก่อนหว่านอาหารทุกจานจะถูกตรวจสอบความสมบูรณ์ จากนั้นบนจานเพาะเชื้อจากด้านล่าง บนหลอดทดลองในส่วนบนที่สาม พวกเขาจารึกชื่อของวัสดุที่ฉีดวัคซีนหรือใส่จำนวนการวิเคราะห์และวันที่หว่านเมล็ด

เทคนิคการปลูกพืชโดยใช้สารอาหารที่เป็นของแข็งและของเหลว

2. เมื่อหว่านบนวุ้นเนื้อเปปโทน ให้ใช้หลอดทดลองในมือซ้ายระหว่างนิ้วที่ 1 และ 2 เพื่อให้ฐานของหลอดอยู่บนพื้นผิวของมือและฉีดวัคซีนภายใต้การควบคุมของ ดวงตา. ไม้ก๊อกจะถูกลบออกจากหลอดทดลองด้วยมือขวา V และนิ้ว IV โดยไม่ต้องสัมผัสส่วนของจุกที่เข้าไปในหลอดทดลอง นิ้วที่เหลืออีก 3 นิ้วของมือขวายังคงว่างเพื่อจับแบคทีเรีย ผ่านการเพาะเมล็ด ห่วงถือเหมือนปากกาเขียน หลังจากถอดจุกหลอดทดลองแล้ว หลอดทดลองที่มีสารอาหารจะอยู่ในตำแหน่งเอียงเพื่อป้องกันไม่ให้จุลินทรีย์แปลกปลอมเข้าไปในอากาศ

ใส่ห่วงที่มีวัสดุฉีดวัคซีนเข้าไปในหลอดทดลองจนถึงด้านล่าง วางราบลงบนพื้นผิวของสารอาหาร และใช้จังหวะเลื่อนจากด้านล่างขึ้นบน จากผนังด้านหนึ่งของหลอดทดลองไปยังอีกผนังหนึ่ง (รูปที่ 4).

3. เมื่อหว่านบนพื้นผิวของสารอาหารที่มีความหนาแน่นสูงในจานเพาะเชื้อ ถ้วยจะอยู่ในมือซ้าย ในอีกด้านหนึ่ง ใช้นิ้ว I และ II จับก้น และอีกมือ ใช้นิ้ว IV และ V ฝาเปิดเล็กน้อยเพื่อให้วงหรือไม้พายผ่านเข้าไปในช่องว่างได้อย่างอิสระโดยใช้นิ้ว I และ III หรือ I และ II วัสดุทดสอบจำนวนเล็กน้อยถูด้วยห่วงแบคทีเรียเข้าไปในพื้นผิวของสารอาหารที่ขอบจาน (รูปที่ 5) จากนั้นวงจะถูกเผาเพื่อทำลายวัสดุส่วนเกิน แนวหว่านเริ่มต้นจากที่ซึ่งวัสดุตั้งอยู่ ห่วงแบคทีเรียถูกวางราบบนอาหารเพื่อไม่ให้เกิดรอยขีดข่วนบนพื้นผิว และทำลายเส้นให้ทั่วทั้งอาหารหรือในส่วนต่างๆ โดยเริ่มจากการตัดก้นจานก่อน (โดยที่สื่อโปร่งแสง) ออกเป็นหลายส่วนเท่าๆ กัน . ควรใช้ความระมัดระวังเพื่อให้จังหวะที่ใช้โดยลูปอยู่ใกล้กันมากที่สุดเนื่องจากจะทำให้แนวการเพาะโดยรวมยาวขึ้นและทำให้ได้รับอาณานิคมของจุลินทรีย์ที่แยกได้

ข้าว. 5. การเพาะสารอาหารที่เป็นของแข็งในจานเพาะเชื้อ

สำหรับการกระจายวัสดุที่ฉีดวัคซีนอย่างสม่ำเสมอบนพื้นผิวของสารอาหารที่มีความหนาแน่นสูง สามารถใช้ไม้กวาดหรือไม้พายแทนห่วงได้

ด้วยจุลินทรีย์จำนวนมากในวัสดุที่หว่าน พวกมันเติบโตในรูปแบบของฟิล์มที่ครอบคลุมพื้นผิวทั้งหมดของสารอาหาร ลักษณะการเจริญเติบโตของจุลินทรีย์นี้เรียกว่าต่อเนื่องหรือสนามหญ้า การเพาะเมล็ดในสนามหญ้าทำได้เมื่อจำเป็นต้องได้รับการเพาะเลี้ยงจุลินทรีย์ในปริมาณมากของหนึ่งสายพันธุ์

4. เตรียมสารแขวนลอยจากวัสดุที่จะฉีดวัคซีนในความหนาของสารอาหารที่มีความหนาแน่นสูงในน้ำประปาที่ปราศจากเชื้อหรือในสารละลายไอโซโทนิก รวบรวมสารแขวนลอย 0.1-1 มล. ลงในปิเปต (ขึ้นอยู่กับระดับการปนเปื้อนของจุลินทรีย์ที่คาดไว้) และเทลงในจานเพาะเชื้อที่ว่างเปล่า หลังจากนี้ถ้วยจะเต็มไปด้วยวุ้นเนื้อเปปโทน 15-20 มล. ละลายและทำให้เย็นลงที่อุณหภูมิ 40-45 ° C (ที่อุณหภูมินี้หลอดทดลองที่มีสื่อใช้กับแก้มไม่ควรทำให้เกิดแผลไหม้ ความรู้สึก) สำหรับการกระจายตัวของวัสดุทดสอบในอาหารที่มีสารอาหารอย่างสม่ำเสมอ ถ้วยปิดที่มีสารอยู่จะหมุนเล็กน้อยบนพื้นผิวของโต๊ะ

5. การหว่านโดยการฉีดลงในคอลัมน์ของสารอาหารจะดำเนินการในหลอดทดลองที่มีสื่อแช่แข็งในรูปของคอลัมน์ หลอดถูกถ่ายด้วยมือซ้ายตามปกติและตรงกลางคอลัมน์ที่ด้านล่างของท่อจะมีการฉีดวัสดุเข้าไปที่ห่วง

การได้มาซึ่งวัฒนธรรมอันบริสุทธิ์

การแยกเชื้อจุลินทรีย์บริสุทธิ์เป็นขั้นตอนบังคับในการศึกษาแบคทีเรีย วัฒนธรรมบริสุทธิ์เป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการศึกษาคุณสมบัติทางสัณฐานวิทยา วัฒนธรรม วัฒนธรรม ชีวเคมี และแอนติเจน ซึ่งทั้งหมดเป็นตัวกำหนดชนิดของจุลินทรีย์ภายใต้การศึกษา

มีการเสนอวิธีการต่างๆ มากมายสำหรับการแยกเชื้อจุลินทรีย์บริสุทธิ์ออกจากวัสดุที่มีจุลินทรีย์ผสมอยู่มาก วิธีที่ใช้กันอย่างแพร่หลายมากที่สุดคือการแยกทางกลของจุลินทรีย์ที่มีอยู่ในวัสดุทดสอบ เพื่อให้ได้โคโลนีที่แยกได้บนพื้นผิวหรือในระดับความลึกของสารอาหาร

สารอาหารทางเลือกถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลาย กระตุ้นการพัฒนาของจุลินทรีย์เหล่านั้น วัฒนธรรมที่บริสุทธิ์ควรจะถูกแยกออก

จุลินทรีย์บางชนิดมีความไวสูงต่อปัจจัยแวดล้อมบางอย่าง ความต้านทานแต่ละอย่างของจุลินทรีย์ต่อปัจจัยหนึ่งหรืออย่างอื่นถูกใช้เพื่อพัฒนาวิธีการสำหรับการแยกวัฒนธรรมที่บริสุทธิ์โดยการฆ่าจุลินทรีย์ที่มาพร้อมกัน วิธีนี้ใช้เพื่อแยกรูปแบบสปอร์ของจุลินทรีย์ที่ทนต่ออุณหภูมิสูง Mycobacterium tuberculosis ซึ่งไม่แยแสกับการกระทำของสารละลายเข้มข้นของกรดแร่ซึ่งแตกต่างจากจุลินทรีย์อื่น ๆ ที่มีอยู่ในเสมหะ

เมื่อแยกวัฒนธรรมที่บริสุทธิ์ของจุลินทรีย์ที่ทำให้เกิดโรคออกจากวัสดุทางพยาธิวิทยาที่ปนเปื้อนด้วยจุลินทรีย์จากภายนอก บางครั้งพวกมันก็หันไปใช้สัตว์ทดลองที่ติดเชื้อซึ่งไวต่อชนิดของจุลินทรีย์ที่ควรแยกจากวัสดุที่ทำการศึกษา วิธีการทางชีวภาพในการแยกวัฒนธรรมบริสุทธิ์นั้นใช้ในการศึกษาเสมหะสำหรับเนื้อหาของ pneumococci, Mycobacterium tuberculosis

มีวิธีการค่อนข้างน้อยในการแยกแบคทีเรียออกเป็นวัฒนธรรมบริสุทธิ์ โดยทั่วไปจะทำโดยการแยกเซลล์เดี่ยวบนอาหารที่มีสารอาหารที่เป็นของแข็งโดยใช้วิธีการเพาะเชื้อแบบริ้วหรือโดยการเทของเหลวจำนวนเล็กน้อยลงในถ้วย อย่างไรก็ตาม การได้มาซึ่งอาณานิคมเดียวไม่ได้รับประกันความบริสุทธิ์ของวัฒนธรรมเสมอไป เนื่องจากอาณานิคมสามารถเติบโตได้ไม่เพียงแค่จากเซลล์แต่ละเซลล์เท่านั้น แต่จากกระจุกของพวกมันด้วย หากจุลินทรีย์ก่อตัวเป็นเมือกก็มักจะแนบรูปแบบแปลกปลอมเข้าไปด้วย กรณีแยกสายพันธุ์ บาซิลลัสหรือแอคติโนมัยซีเตต จุลินทรีย์ที่ปนเปื้อนสามารถพันกันเป็นสายโซ่เซลล์หรือเส้นใยของจุลินทรีย์เหล่านี้ตามลำดับ ควรใช้สื่อที่ไม่ผ่านการคัดเลือกในการทำความสะอาด เนื่องจากสารปนเปื้อนจะเติบโตได้ดีกว่าและตรวจจับได้ง่ายกว่า แต่ถึงแม้จะเป็นอาหารที่ไม่ผ่านการคัดเลือก ไม่ควรเลือกอาณานิคมอย่างรวดเร็ว เนื่องจากแบคทีเรียที่ปนเปื้อนที่เติบโตอย่างช้าๆ อาจไม่เติบโตในช่วงเวลาที่กำหนด

จากวัฒนธรรมบริสุทธิ์ อาณานิคมเดียวกันมักจะเติบโตและเซลล์ที่คล้ายกันจะถูกตรวจพบโดยกล้องจุลทรรศน์ โดยเฉพาะในขนาดและคราบแกรม อย่างไรก็ตาม อาจมีข้อยกเว้น ตัวอย่างเช่น อาณานิคมที่เติบโตจากวัฒนธรรมบริสุทธิ์อาจเป็นแบบเรียบ (S) และแบบหยาบ (R) นอกจากนี้เซลล์ coccoid ซีสต์และสปอร์อาจปรากฏในวัฒนธรรมบริสุทธิ์ของจุลินทรีย์ต่างๆ ในที่สุด จุลินทรีย์บางชนิดแสดงความแปรปรวนแกรม อย่างไรก็ตาม เกณฑ์เหล่านี้ใช้กันอย่างแพร่หลายในการพิจารณาความบริสุทธิ์ของวัฒนธรรม

หว่านโรคหลอดเลือดสมอง

ที่ Gดี

ข้าว. 6. วิธีที่สะดวกสำหรับสตรีคเพลทสำหรับโคโลนีเดี่ยว A. สำหรับการทำเครื่องหมายที่ด้านหลังของจานเพาะเชื้อจะใช้ตัวอักษร T ด้วยดินสอโดยแบ่งด้านล่างออกเป็น 3 ส่วน ข. วงจรการเพาะเลี้ยงซิกแซกถูกลายลงบนพื้นผิวของวุ้นในส่วนที่ 1 ดังแสดงในรูป เมื่อต้องการทำเช่นนี้ ฝาถ้วยจะถูกยกขึ้นก่อน และหลังจากใช้จังหวะ จะปิดทันที ห่วงถูกฆ่าเชื้อด้วยเปลวไฟและปล่อยให้เย็น (15 วินาที) C. วาดวงบนพื้นผิวของตัวกลางในส่วนที่ 1 ดังแสดงในรูป จากนั้นใช้จังหวะกับมันในรูปแบบซิกแซกทันทีบนพื้นผิวของตัวกลางในส่วนที่ 2 อุ่นวงในเปลวไฟและปล่อยให้ ให้เย็น ง. วาดวงบนพื้นผิวของตัวกลางในส่วนที่ 2 ดังที่แสดง แล้วใช้จังหวะซิกแซกบนพื้นผิวของตัวกลางในส่วนที่ 3 บนพื้นผิวของวุ้น อาณานิคมจำนวนมากเติบโตในภาคที่ 1 ในขณะที่อาณานิคมที่แยกตัวออกมาดีแต่ละแห่งปรากฏในภาคที่ 2 และ 3

การได้มาซึ่งวัฒนธรรมที่บริสุทธิ์โดยการกรองในระดับความลึกของตัวกลาง (ตาม Koch)

หลังจากที่สื่อที่มีวัสดุทดสอบแข็งตัวแล้ว ถ้วยจะถูกวางในเทอร์โมสตัท จำนวนโคโลนีในจานเพาะเลี้ยงจะลดลงเมื่อวัสดุถูกทำให้เจือจาง

การแยกวัฒนธรรมบริสุทธิ์ตามวิธี Drygalsky

วิธีการกรองพื้นผิวที่เสนอโดย Drygalsky เป็นวิธีที่ใช้กันมากที่สุดเพื่อให้ได้จุลินทรีย์บริสุทธิ์ คุณสามารถใช้ไม้พายแทนไม้พายได้ วัสดุบนสารอาหารจะกระจายเป็นจังหวะคู่ขนานทั่วทั้งถ้วยในทิศทางเดียว จากนั้นหมุนถ้วย 180° วาดเส้นไปในทิศทางตั้งฉากกับจังหวะแรก ด้วยวิธีหว่านเมล็ดนี้ วัสดุบนห่วงจะถูกบริโภคทีละน้อย และอาณานิคมที่แยกได้ของจุลินทรีย์จะเติบโตตามแนวกริดที่ใช้เมื่อสิ้นสุดการหว่าน

Anaerobic anaerobe สำหรับการเพาะปลูกแบบไม่ใช้ออกซิเจน